ההליך הכירורגי שלנו מאפשר עריכת גנים ספציפית של תאים לפטוטומניים כדי לחקור את תפקודם במצבים פיזיולוגיים ופתולוגיים רבים כגון התפתחות עצבית והתפשטות של דלקת קרום המוח חיידקית. כדי למזער את הנזק במהלך הלידה תוך גולגולתית של אנדוקסיפן, אנו משתמשים במחט מכופפת שניתן לאבטח כנגד הקצה caudal של הגולגולת כדי למנוע ממנו לחדור עמוק יותר ברקמה. ההליך יכול לשמש כדי לחקור את התפקיד של גנים המבטאים תאים leptomeningeal באמצעות אובדן ולהשיג ניסויים פונקציה.
זה יכול גם להיות מאומץ כדי לעקוב אחר זרימת הנוזל השדרתי. הדגמה חזותית של שיטה זו תבטיח זיהוי מוצלח של אתר ההזרקה להזרקה תוך-ירתית והבנה כיצד לאבטח את המחט כנגד עצם העורף. התחל על ידי הכנת מזרק המילטון עם מחט משופעת 30 מד להזרקה.
השתמש מדפים לכופף את המחט ל 30 מעלות שלושה מילימטרים מה קצה. לאחר מכן, לדלל אנדוקסיפן ב 10%DMSO לריכוז של מיליגרם אחד למיליליטר ולמילוי אחורי של המזרק. הרדמה את החיה בתא isoflurane.
לאחר מכן התאימו את מחזיק ראש העכבר כך שהמשופר יהיה בזווית של כ-30 מעלות מפני השטח של השולחן הכירורגי ותקנו את ראש החיה על המחזיק. כדי לשפר את הנגישות לאגנה cisterna, למקם את הגוף של החיה על כ 30 מעלות מפני השטח של השולחן עם הראש מוטה כלפי מטה אשר יבסס זווית של 120 מעלות עם שאר הגוף ולהרחיב את החלק האחורי של הצוואר כדי להקל על גישה מגנה cisterna. לאחר החיה ממוקמת כראוי, להחיל משחה עיניים, לגלח את החלק האחורי של צווארו, ולחטא את האזור עם מגבונים אלכוהול Betadine.
השתמש מספריים כירורגיים כדי להפוך חתך קו האמצע החל ברמה של עצם העורף ומתרחב אחורי. הפרד בעדינות את רקמת החיבור השטחית ואת שרירי הצוואר על ידי משיכת הצידה מקו האמצע עם פינצטה עדינה שתחשוף את קרום dural overlying מגנה cisterna. מקם מפריד כירורגי קטן כדי לאפשר הדמיה של מגנה cisterna לאורך כל ההליך.
לזהות את הקצה caudal של עצם העורף ולהכניס את המחט כפופה בעבר מיד מתחת. לאחר שהדורה מחוררת, אפשר לקצה הכפוף של המחט לחדור מתחת לפני השטח על ידי משיכת המזרק בעדינות כלפי מעלה ובמקביל לגוף החיה שתבטיח יציבות טובה יותר. להזריק את המתחם לאט כדי למנוע הפרעה עם הזרימה הטבעית של נוזל השדרתי.
לאחר הזריקה, תן את המחט לנוח בפנים במשך דקה אחת, ולאחר מכן להסיר אותו בזהירות בעזרת מדפים קצה בסדר. סגור את העור עם כמה טיפות של דבק cyanoacrylate ולהחיל הרדמה מקומית באתר ההזרקה. מוציאים את החיה מהמחזיק ומ מניחים אותה בכלוב נקי על משטח חימום.
לאחר מכן הקפד לפקח על החיה עד שהיא חוזרת להכרה. הזרקה תאית של אנדוקסיפן בעכברים מהוססים המבטאים CreER תחת מקדם Cx30, כתב פלואורסצנטי בלתי ניתן לחיסון מאפשר קומבינציה ספציפית של תאים לפטומננינגאליים מבלי לתייג את Cx30 השכן המבטא אסטרוציטים פני השטח ואסטרוציטים על-טבעיים בקליפת המוח. פרוטוקול הזרקה זה מנצל את התנועה הפיזיולוגית של הנוזל השדרתי כך פתרון אנדוקספין מופץ בכל החלל התת-ארוקנואידי ביעילות recombine leptomeningeal תאים כיסוי נורות הריח, קליפת המוח, ו המוח הקטן.
הפתרון אינו חוצה את מחסום קרום המוח במוח או בא במגע עם תאים אסטרוגליאליים של parenchyma לעומת ניהול מערכתי באמצעות gavage אוראלי. רקומבינציה של תאים לפטוניים לאחר הזרקת תאיות זוהתה באמצעות תגובתיות Pdgfr-אלפא בעוד אסטרוציטים פני השטח ועל-טבעי המבטא Gfap נשארו ללא תותבת. בעת ניסיון ניסוי זה, חשוב לאתר את אתר ההזרקה למסירה תוך-ירתית.
הדגמה חזותית זו מספקת את היידע הטכני לבצע את ההליך תוך מזעור הסיכון לפגיעה ברקמה העצבית שתחתיו. מחקרי אבלציה ג'ין יכול להתבצע עם טכניקה זו כדי לחקור את התפקיד של תאים leptomeningeal ב corticogenesis ורגולציה של היווצרות נוזל השדרתי ולזהות אתרים נוספים להתפשטות של חיידקים בחלל subarachnoid.
