Name: murine distal colostomy, a novel model of diversion colitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הרשות וטרינרי ממשלתי (לדנציג Landesamt Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei מקלנבורג-מערב פומרניה, (LALLF M-V)).
1. לפני הניתוח טיפול והכנה של החיה
<ol><li>עם ההגעה במתקן של בעלי חיים, חלק חיות (C57Bl/6) לקבוצות גודל דומה, לכלוא כל קבוצה ביחד ולשמור קבוצות קבועה לאורך כל הניסויים. הערה: השתמש חיות מאותו המין. הממצאים המתוארים התקבלו עם עכברים זכרים. הערה: אם זכר בעלי חיים משמשים, קבוצות כלוב יחד מתחיל כאשר הם בגיל 7 שבועות, כך ניתן ליצור היררכיה, ובכך למזער את הסיכון של התנהגות אגרסיבית במהלך הניסויים.</li>
	<li>לפחות שבוע לפני הניתוח, לעבור אנרגיה גבוהה (> 14 MJ/kg) וחלבון גבוהה (> 20%) להאכיל המכיל את כל יסודות קורט חיוניים וויטמינים (לפרטים, ראה רשימת חומרים). הערה: מבטיח כל העכברים שוקלים לפחות 25 g כאשר הניתוח מבוצע.</li>
	<li>זירוז אלחוש, שיכוך כאבים באמצעות הזרקת בקרום הבטן של קטאמין (i.p. 87 מ"ג/ק"ג), חריגות השירותים הווטרינריים הידרוכלוריד (i.p. 13 מ"ג/ק"ג). המתן עד העכבר סובלנית גירוי מכני, למשל הבוהן זפת, ללא תגובה מוטורית.</li>
	<li>אבטח את העכבר narcotized עם קלטות במצב פרקדן על אנדרליי חום מוצב השולחן מבצע, המבטיח של אובדן חום גוף מהמם מיצוב במהלך מבצע והימנעות יציב. הערה: אנדרליי חום צריך טמפרטורת פני שטח של 36 ° C עד 40 מעלות צלזיוס; טמפרטורת הפעלה החדר צריך להיות 21 ° C.</li>
</ol>2. מבצע דיסטלי למעי הגס
<ol><li>לגלח את השיער בבטן. לפני תחילת הניתוח, לחטא את השדה מבצע שלוש פעמים באמצעות אלכוהול 70% של iodophor. לעטוף את שדה הפעולה כדי להבטיח תנאים אספטי.</li>
	<li>לבצע פתיחת בטן החציוני של 15 מ מ על-ידי אם את שרירי הבטן ואת של הצפק לאורך לינאה אלבה, ובכך למזער את אובדן דם.</li>
	<li>להשתמש מלקחיים atraumatic דה-בייקי שני, משוך בזהירות את המעי האטום, ileum מסוף, עולה ואת המעי הגס של חלל הצפק. הערה: הקפד להגביל באופן מכני מניפולציה של המעי כדי למנוע פגיעה במבנים מצע המעי העליון.</li>
	<li>לזהות את הקוטב cecal, עולה המעי הגס ו המעי הדק (דמויות 1a ו 1b). הערה: זיהוי נכון של הגס עולה הוא מהותי עבור מיקום נכון של למעי הגס. במקרים בהם האנטומיה של האזור ileocecal רב-משמעי, הנוכחות של טלאים של פייה מזהה המעי הדק, הנוכחות של צואה בנוי המאפיינת את המעי הגס.</li>
	<li>להשתמש בסרגל כדי לקבוע את המיקום של למעי הגס בעתיד. זה צריך להיות ממוקם 20 מ מ דיסטלי לשסתום ileocecal עבור למעי הגס דיסטלי.</li>
	<li>עושים חתך 3 מ מ השני בקיר הבטן ברבע העליון נכון. משוך על קטע המעי הגס שזוהה קודם לכן דרך החתך כדי ליצור לולאה, נזהר שלא לעוות את הלולאה.</li>
	<li>להעביר בזהירות קליבר 22 גמיש הזרקה דרך לפדר האחורי. . שמור על עצמך שלא יגרמו נזק למבנים וסקולרית מצע המעי העליון.</li>
	<li>לחזור המעי חלל הצפק.</li>
	<li>לתקן את שני הקצוות של הצינור הגמיש על העור באמצעות תפרים פשוטים, בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>לפני סגירת את פתיחת בטן, לבצע החייאה נוזלים באמצעות זריקה בקרום הבטן של 0.5 מ ל 0.9% תמיסת מלח.</li>
	<li>סגור של הצפק, השכבה שריר בתפר רצוף באמצעות בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1/2 c). סגור את העור בתפר רצוף באמצעות בתפר resorbable (למשל, polyglactin 910 או polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>פתח את לולאת המעי הגס יהיו exteriorized על ידי ביצוע של חיתוך של סכומי ביניים באמצעות מספריים משובחים. למנוע כל פגיעה מצע המעי. לא transect המעי הגס לחלוטין.</li>
	<li>לתקן כל הפתיחה למעי הגס באמצעות שלושה תפרים מלא-עובי יחיד הצפק, העור באמצעות a monofil, תפר שנספג (למשל, polydioxanone או monofil, 6-0 3/שמיניות). הלולאה מביא, שהוא הקצה פונקציונלי-למעי הגס, ואת הלולאה efferent, אשר פיסטולה ריריות, מופרדים באופן ברור בנקודה זו (איור 1 c). הערה: זמן הפעולה צריכה להיות פחות מ-20 דקות כדי להגביל הפסדים תרמיים של נוזלים.</li>
	<li>לאחר סיום הניתוח, לחיטוי מכשירים באמצעות פתרון נטולת אלדהיד לחיטוי באמבט אולטראסוני לפי ההוראות של היצרן.</li>
</ol>3. המזויפים מבצע (Colotomy)
<ol><li>בצע שלבים 1.1. דרך 2.4.</li>
	<li>להשתמש בסרגל כדי לקבוע את מיקום colotomy בעתיד. Colotomy שנמצאת באותו המרחק מן השסתום ileocecal כמו למעי הגס ב קבוצת הניסוי.</li>
	<li>פתח את המעי הגס לפחות שני שלישים והיקפו באמצעות מספריים משובחים.</li>
	<li>סגור colotomy עם שכבה אחת, מלא-עובי קטע התפר באמצעות a monofil, שנספג תפר (למשל, polydioxanone, monofil, 6-0 3/שמיניות). הערה: זמן הפעולה צריך להיות פחות מ-20 דקות בשביל מנתח experimented, הגבלת הפסדים תרמיים של נוזלים.</li>
	<li>בצע שלבים 2.10. , 2.11. 2.14.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>לחזור חיות הכלובים. מספקים אווירה היטב מחוסמת של 37 ° C (למשל, עם מנורת אינפרא-אדום) עד עכברים ער לגמרי. לאחר מכן, לשמור על עכברים בסביבת טמפרטורה, לחות-מוסדר (21 ° C; 30% ± 10% לחות יחסית). לאפשר גישה חופשית מזון ומים לשתיה. כדי להקל על ספיגת נוזלים, לספק הזנה בבעלי חיים ספוגי מים נוספים.</li>
	<li>מתחילים כאבים לאחר הניתוח על ידי הזרקת 0.1 מ"ג/ק"ג גוף במשקל הבופרנורפין ספורטינג כאשר בעלי חיים מראים תגובת גירוי מכני. להיות זהירים כדי למנוע דיכאון בדרכי הנשימה.</li>
	<li>תוספת שתייה עם 1 מ"ג/מ"ל טרמדול עבור המשך כאבים במהלך השבוע לאחר הניתוח הראשון.</li>
	<li>כדי לפצות על צריכת הנוזלים ירד עקב צמצום הניידות, לספק משטח מוצק לשתות בכלוב בשבוע הראשון לאחר הניתוח.</li>
	<li>שוקל החיות והתנהגות בעלי חיים ציון מדי יום במהלך השבוע הראשון, בכל יום שני במהלך שארית החודש הראשון, בכל יום שלישי במהלך החודש השני באמצעות התוצאה חומרת המחלה המתוארים Kleinwort. et al. 6.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream.">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li><li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gastrointestinal Pathology. , (1972).</li><li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversion+colitis.+A+prospective+study.">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li><li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy.">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li><li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+colitis+models:+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues.">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li><li>Kleinwort, A., D&#246;ring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis.">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13 (2017).</li><li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles,+lymphocyte+function,+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice.">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li><li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coprophagy+in+animals:+a+review.">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li><li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet.">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li><li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice:+a+Role+for+Estrogens.">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li><li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane/Dextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer.">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li><li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+sepsis:+cardiovascular+and+immunological+aspects.">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li><li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+Behaviour,+reproduction,+and+population+changes+in+the+house+mouse+(Mus+musculus+L).">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li><li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+(Mus+musculus+L.)+in+colonies+of+different+sizes.">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li><li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight,+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL/6J+mice.">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li><li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+and+water+are+not+simple+conditions:+fine+tuning+of+animal+housing+in+male+C57BL/6+mice.">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li><li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response+of+C57BL/6J+and+BALB/cJ+mice+to+increased+housing+density.">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li><li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions.">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li><li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis.">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li><li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li><li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differences+among+C57BL/6+substrains.">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li><li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains:+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice.">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li><li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-1/M-2+macrophages+and+the+Th1/Th2+paradigm.">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li></ol>

כל המחברים מצהירים כי יש להם אין אינטרסים מתחרים.

המודל מאתר של DC הוצג פרוטוקול זה אמין מתרבה התכונות histopathological של האדם DC (למשל, פיתוח דה נובו של זקיקי הלימפה submucosa של מקטעי מעי מודלק, קריפטה קיצור הפחתות מספרי הטלפון הנייד גביע). מלבד יתרון זה, מודל זה הנגרמת על ידי גורם מפעילה דומה מאוד, מציג עם קורס קליני של בינוני עד סיכון מתון כמו במקרה של בני אדם המושפע ביותר.
כדי להשיג תוצאות לשחזור, מקובל perioperative קטלני, הכרחי להתאמן בטכניקות מיקרוכירורגיות בא לידי ביטוי. עם זאת, ניתן לבצע הפעולה למעי הגס והן דמה (colotomy) עם perioperative נמוך מאוד בהירושימה (< 10%). כמה צעדים מבצעית בעלות חשיבות גדולה: 1) מעי הגס ומסוף לזהות באופן חיובי. במקרים בו האנטומיה של האזור ileocecal לא ברור, המעי הגס יכול להיות מזוהה על ידי הנוכחות של צואה בנוי ואת ileum מסוף על ידי הנוכחות של המדבקות של פייה. 2) כאשר exteriorizing הלולאה למעי הגס, מבטיח שמצע המעי לא הוא העווה, וכך להימנע איסכמיה מצע המעי העליון ועל מכניים ileus. 3) כאשר ניקב את מצע המעי עם הצינור הגמיש, מבטיח שבמגזר נטולת כלי נבחר, ובכך למנוע דימומים וסיבוכים מצע המעי העליון איסכמיה. 4) בעת יצירת חתך קטן בדופן הבטן, בדוק אם יש מספיק hemostasis. אם יש צורך, להשתמש התרמו-קרישה כדי לעצור דימום מכלי שריר. 5) מבטיח המעי הגס לולאה פתוחה לפחות-שני שליש והיקפו, כי הקיר האחורי הוא מספיק אוזני, ומבטיח חסימה מלאה של מעבר צואה המקטעים המעי הדיסטלי. 6) מבטיח כי בשני הקצוות למעי הגס קבועים היטב על העור כדי למנוע מעבר פתוח אל חלל הצפק וכתוצאה סיכוני זיהום גבוה יותר או ileus מכני כי הזרם צואה יכול לצאת. בדרך כלל, כל הניתוחים יכול להתבצע ללא זכוכית מגדלת או מיקרוסקופ כירורגי. באופן כללי, ניצול של התקנים אלה דורש הכשרה נוספת.
אפילו כאשר המורכבות של הניתוחים הוא רק בינוני, ישנם נושאים מהותיים רבים פעיל ו- perioperative כדי להיחשב לסיים בהצלחה את הניסוי עם תוצאות לשחזור.
זה חיוני להישרדות לטווח ארוך עם למעי הגס קבע שיש עכברים של המעי האטום ללא פגע. קבוצת הניסוי עם צמוד לשסתום ileocecal הפרוקסימלית שנזקקו להחלפת בגדים הראו שיעור תמותה של 100% בשבוע הראשון לאחר הניתוח בגלל אובדן משקל בלתי הפיך (נתונים לא מוצג). לכן, הוא בעל חשיבות עליונה לבחירה באתר למעי הגס לפחות 20 מ מ דיסטלי שסתום של Bauhin. התבוננות זו יכול להיות בגלל הפיזיולוגיה של מערכת העיכול מכרסמים. התחבורה רטרוגרדית מן המעי הגס הפרוקסימלית. המעי מתרחשת אצל המינים הללו. המעי הוא היכן הסינתזה של חומרים מזינים ידי occurs8 microflora חיידקי. ערכי MCV נורמלי ו MCH במהלך לטווח ארוך מציינים כי בעלי חיים דיסטלי שנזקקו להחלפת בגדים אינם סובלים בויטמינים משמעותית. יתר על כן, coprophagy הוא חלק חיוני של ההתנהגות התזונתית של מכרסמים בסביבות הטבעי שלהם. בעת יצירת המודל, היינו מאוד מודאגים כי perturbing את coprophagy בשל הנוכחות של למעי הגס קבוע יכול לגרום חוסרים תזונתיים, (למשל, ויטמין B). עם זאת, אמנם זה בעיה בתנאים שבו גישה חומרים מזינים היא מוגבלת, בעבר הוכח ש-coprophagy זה מאבד מערכו התזונתי בתנאים ניסיוני עם עודף ללא מים ומזון מאוזן תזונתית9 . בתנאים ניסיוני שלנו, זה חיוני כדי למטב את התנאים של צריכת תזונה לאחר הניתוח. השתמשנו תזונת בעלי חיים היה תוכן חלבון גבוהה, אופטימיזציה חלבון איכותי, גדלה צפיפות אנרגיה. בעלי חיים היו התאקלם דיאטה זו לפחות שבועיים לפני הניתוח. במשככי, הזנה ספוגי מים הוצע ad libidum faciliate מזון, צריכת הנוזלים.
חשוב לנצל את עכברים מאותו המין בשתי הקבוצות ניסיוני, העמדת פנים. סקס הוכח להשפיע באופן משמעותי את הקורס לא רק של דלקת מערכתית, אלא גם של דלקת מעיים שונות קוליטיס בהשפעת כימיקלים מודלים10,11,12. באופן כללי, חיות זכר יפתחו מחלה מובהק יותר עם דלקת רבתי, נזק קריפטה יותר, פחות התחדשות, רמות גבוהות יותר של ציטוקינים פרו-דלקתיים, החלמה איטית של אובדן משקל10. יתרון נוסף של שימוש חיות זכר הוא טוב יותר משקולות גיל מתאימים הגוף לפני הניתוח, שמוביל פיצויים טוב יותר של תקופת אובדן משקל לאחר הניתוח הראשוני. למרות זאת, עכברים הנשי ניתן להשתמש בפרוטוקול אם ספציפי שאלות (למשל, השפעתה של סקס יש לטפל ההורמונים על הביטוי של DC. שימוש בעכברים זכרים דורש יותר מאמץ בשמירה על תנאי מגורים יציב. עכברים זכרים נוטים יותר אגרסיבי אינטראקציות שמוביל לפציעה ומוות. עכברים זכרים חיים הירארכיות הוקמה עם זכר דומיננטי אחד. לאחר ההירארכיה בקבוצה הוא הוקם, המשך הלחימה הוא פחות נפוץ13,14. מסיבה זו, אנו הקימו את הקבוצות ניסיוני עם ההגעה של העכברים במתקן שלנו בעלי חיים לפחות שבועיים לפני הניתוח, שמר על קבוצות אלה עד הניסויים הסתיים. באופן כללי, קבוצות ניסיוני של 5 עד 7 חיות הוחזקו בכלוב אחד. תחזוקה של חברתי יציב, מתנאי הדיור היה בעל חשיבות עליונה לא רק כדי לצמצם התנהגויות אגרסיביות של חיות ניסוי. תנאי דיור הוכחו להשפיע על עלייה במשקל, כמו גם פרמטרים אימונולוגי15,16,17.
הרגישות קוליטיס בהשפעת כימיקלים, מהונדס גנטית מודלים משתנה במידה ניכרת בין עכבר זנים18,19,20. בפרוטוקול הנוכחי הוקם בשנת C57Bl/6 עכברים, זן עכבר עם רקע גנטי מוגדר היטב, של המערכת החיסונית מאופיין היטב21,22,23 המציג ביניים חזק דלקתיות התגובה לתוספי חומצה גופרתית קוליטיס נתרן-induced דגם20 ונחשב זן Th1 ומופת23. השימוש של זנים אחרים העכבר יכול להיחשב כאשר נדרשת פעילות המחלה חמורה יותר או סביבת Th2.
לסיכום, פרוטוקול שלנו מהווה כלי חשוב להערכת את התפקיד של סוגים שונים של תאים חיסוניים, ציטוקינים, נוגדנים אחרים מולקולות האיתות בפתוגנזה של DC. מספר רב של מודלים מהונדס גנטית עכברים הינם זמינים עם רקע C57BL/6, יכול להיות משולב עם המודל שלנו (למשל, עכברים לקוי של IL-17, IL-10, כימוקין CXCL13, כימוקין-קולטנים CXCR5 CCR7 ו sphingosine-1-פוספט קולטן 4). הזמינות של זנים העכבר congenic על רקע C57BL/6 בעיקר להקל על העברת הניסויים להקים את התפקיד של סוגי תאים נפרדים מעורב האטיולוגיה של DC. בסופו של דבר, המודל מציע את ההזדמנות כדי להעריך את השפעת התערבויות מקומיים (למשל, שינוי של microbiome מקומיים, טיפול אנטי דלקתי מקומי) על חסינות הרירית בקטעים המעי הנגוע, שאינן מושפעות ועל מערכתית הומאוסטזיס המערכת החיסונית.

בשנים האחרונות, מספר ניכר של קוליטיס שאינן זיהומיות ישויות שונות ממחלות מעי דלקתיות קלאסית (IBDs; כלומר-, או קוליטיס ulcerosa קרוהן) יש כבר קליניות, histopathologically מאופיין אצל בני אדם. המנגנונים הקשורים pathophysiological המובילים להתפתחות של צורות אלה קוליטיס אינם לגמרי מובנים חלקית כי המתאים מודלים בעלי חיים נדירים. קוליטיס הסחה הוא אחד הישויות הללו תיאר לאחרונה. למרות שהמונח הוטבע בשנת 1980 על ידי Glotzer1, התיאור הראשוני של הפנוטיפ דומה ניתנה בשנת 1972 על-ידי Morson2. המחלה מתפתחת ב 50 91% מהחולים עם הטיית enterostomy, בעוצמתה קליני משתנה3,4. לאור השכיחות שנתי של 120,000 חולי למעי הגס ב ארצות הברית של אמריקה, ישות מחלה זו מהווה בעיה בריאות חשובה.
המטרה הכוללת של פיתוח פרוטוקול זה היה לספק מודל DC מאתר זה מסתמכת על גורם קוליטיס דומה כי ראיתי בוושינגטון האנושית ואת זה מתרבה התכונות histopathological של המחלה האנושית. לעומת דגמים אחרים מאתר קוליטיס, קוליטיס אינדוקציה במודל שלנו אינה דורשת מהונדסים בעלי חיים (למשל, העכברים הטרנסגניים IL-7, N-קדהרין עכברים שלילי דומיננטי או עכברים TGFβ- / - ), היישום של כימית מעצבן חומרים (למשל, לתוספי סולפט נתרן (DSS) - קוליטיס המושרה, או חומצה sulfonic trinitrobenzene (TNBS) - induced קוליטיס) או ההעברה של אוכלוסיות תאים מסוים בעכברים לקוי מערכת החיסון (כמו העברתגבוהה CD45RB מודל של קוליטיס) (לסקירה, ראה5). לעומת דגמים אחרים, המערכת החיסונית שלם של מודל DC שלנו מאפשרת הערכה של מנגנון אימונולוגי מעורב בפיתוח DC. המגבלה של דלקת הרירית את פלח המעי נשלל מאפשר הערכה של השלכה שלה על חסינות הרירית בחלקים אחרים מערכת העיכול, על הומאוסטזיס החיסון בתאים חיסוניים אחרים של מערכת העיכול (למשל , Mesenteriale הלימפה ותיקונים של פייה), וביום של הומאוסטזיס המערכת החיסונית של האורגניזם כולו. בסופו של דבר, המודל שלנו מהווה כלי המתאים עבור חוקרים את מנגנוני שליטה גירויים דלקתיות מקומיים שמקורם שינויים בסביבת המקומי הרגיל הן microbiome המקומי כמו גם אנטיגנים מסולקים.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;Operation material&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>heat underlay, 6 watt</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70% (with methylethylketon)</td><td>Pharmacie of the University Hospital Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length</td><td>Centramed GmbH, Germany</td><td>8308370</td><td>for disinfection of operation field</td></tr><tr><td>Scissor</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Atraumatic DeBakey forceps</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety &lt;em&gt;i.v.&lt;/em&gt; cannula 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>VCP994H</td><td></td></tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Germany</td><td>18824-01</td><td>disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Medications&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine)</td><td>Bayer, Germany</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 mg/kg &lt;em&gt;s.c.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride)</td><td>Gr&amp;uuml;nenthal GmbH, Germany</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL drinking water</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)&amp;nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Germany</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg body weight &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>metronidazole 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 mg/kg body weight &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Food&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Germany</td><td>&amp;nbsp;V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches</td><td>TripleATrading, the Netherlands</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td>light microscopy</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&amp;nbsp;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Veterinary hematology analyzer of 50 &amp;micro;l venous EDTA-blood</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath)</td><td>Bandelin electronics, Germany</td><td>RK 100 H</td><td>disinfection of surgical instruments</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Software&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine distal colostomy, a novel model of diversion colitis in c57bl/6 mice

הסחה קוליטיס (DC) הוא מצב קליני תכופים המתרחשים אצל חולים עם קטעי המעי נכללו הנחל צואה כתוצאה enterostomy להסיט. האטיולוגיה של המחלה נשאר מעורפל אבל נראה שונים של מחלות מעי דלקתיות קלאסית כמו קוליטיס ומחלת קרוהן. במחקרי לפענח את המנגנונים הקשורים pathophysiological המובילים להתפתחות של מחלה זו יש כבר את מימושן היעדרה של מודל מאתר המתאים. פרוטוקול זה יוצר מודל מאתר של DC המקל על הלימוד התפקיד של מערכת החיסון ביחסיו עם microbiome בפיתוח של DC. במודל זה באמצעות בעלי חיים C57BL/6, דיסטלי חלקי המעי הגס אינם נכללים הנחל צואה על-ידי יצירת למעי הגס הדיסטלי, מפעילה את התפתחות קל עד בינוני דלקת מקטעי מעי שלא נכללו מתרבה נגעים סימן ההיכר של האדם DC עם תגובה דלקתית מערכתית מתונה. בניגוד לדגם עכברוש, מספר רב של מודלים מאתר מהונדס גנטית על רקע C57BL/6 הינם זמינים. השילוב של בעלי חיים אלה עם המודל שלנו מאפשר את התפקידים פוטנציאלי של ציטוקינים בודדים, נוגדנים או קולטנים של מולקולות ביו (למשל, אינטרלויקין (IL)-17; IL-10, כימוקין CXCL13, כימוקין רצפטורים CXCR5, CCR7 ו sphingosine-1-פוספט הקולטן 4) לפנות לבדיקה בפתוגנזה של DC. הזמינות של זנים העכבר congenic על רקע C57BL/6 במידה רבה מקלה על העברת הניסויים להקים את התפקידים של סוגי תאים נפרדים מעורב האטיולוגיה של DC. בסופו של דבר, המודל מציע את ההזדמנות כדי להעריך את ההשפעות של התערבויות מקומיים (למשל, שינוי של microbiome המקומי או טיפול אנטי דלקתי מקומי) על חסינות הרירית בקטעים המעי הנגוע, שאינן מושפעות ו- הומאוסטזיס המערכת החיסונית מערכתית.

הניתוח הוא נסבל היטב הן את ניסיוני (למעי הגס) והקבוצות דמה (colotomy). התמותה Perioperative לא יעלה על 10% בעת ניתוח וניהול perioperative מבוצע כהלכה. בשבוע שלאחר הניתוח הראשון, הרזיה משמעותית נתפסת בשתי הקבוצות ניסיוני, שאם. חיות של קבוצת המזויפים להשיג שלהם נאדיר משקל בדרך כלל לקראת היום הרביעי לאחר הניתוח, אך היא מתרחשת יום אחד מאוחר יותר קבוצת הניסוי. ירידה במשקל מודגש יותר בקבוצה ניסיוני, להגיע 21.7% ממשקל הגוף הראשונית. לעומת זאת, בעלי החיים המזויפים לאבד 10.8% של הגוף הראשונית שלהם, משקל (איור 2)6. לאחר נקודת השפל משקל בשבוע הראשון לאחר הניתוח, משקל הגוף עולה באופן רציף בשתי הקבוצות ניסיוני, אבל עם מדרון לאט יותר בקבוצת הניסוי. הסימנים והתסמינים של דלקת מעיים חמורה (קרי, הפרשות דם או המעיים נוזלית להתרחש גם את ניסיוני ולא דמה קבוצה6). התמותה הכולל במהלך 60 הימים הראשונים במשככי הוא בסביבות 40% בקבוצה למעי הגס על 10% בקבוצה colotomy. רוב מקרי מוות מתרחשים במהלך השבוע שלאחר הניתוח הראשון (61% בקבוצה ניסיוני, 66% בקבוצה דמה). הסיבות העיקריות למוות מוצגים באיור3.
דיסטלי למעי הגס בעכברים תוצאות בפיתוח של קוליטיס בעיקר לימפוציטית מתרבה התכונות היסטולוגית סימן ההיכר של DC אנושי. שינויים אלה להגדיל עם המשך של הדרה מעיים. קריפטה אורך מתקצר משמעותית בקטעים שלא נכללו המעי. קיצור זה מגיע מובהקות סטטיסטית אחרי 14 ימי הסחה צואה (איור 3 א). אורך קריפטה בגביע תא מניבי פוחת לאחר 30 ימים בקטעים שלא נכללו המעי (איור 3b). מספרי הטלפון הנייד גביע מוחלטת מופחתים משמעותי גם באולמות קטע המעי נשלל לאחר 14 ימים לאחר הניתוח (איור 3 c). הנגע סימן ההיכר של DC, הפיתוח של זקיקי הלימפה רירית, נדרש משך זמן ארוך יותר של צואה סטייה. למרות עלייה במספר זקיקי הלימפה יכול להיות שנצפו מוקדם ככל שבועיים, ההבדלים להיות משמעותי לאחר חודשיים (דמויות 5a-c). כל השינויים histopathological תיאר לפני מודגשת יותר ב דיסטלי יותר באזורים הפרוקסימלית של הקטעים שלא נכללו המעי. לחדור neutrophilic טיפוסי סימן לדלקת חריפה היא בדרך כלל לא נצפו (דמויות 5 d-e).
סימן השלכה מערכתית של דלקת מעיים מקומית, ספירת נויטרופילים הם משמעותי מוגברת בבעלי חיים למעי הגס מוקדם ככל 14 ימים לאחר הניתוח. הבדל זה נשמר עד לסוף תקופת תצפית (60 יום). ספירת טסיות הינם מעט מוגברת אצל בעלי חיים עם הסחה שטיפת המעי הגס לאחר 60 ימים (איור 6). רמת ההמוגלובין, המטוקריט מופחתים 14 ימים לאחר הפעולה בקבוצה למעי הגס לעומת הקבוצה המזויפים.
הוכח כי מחסור בויטמינים ב מכרסמים גורמים מופחת נפח corpuscular רשע (MCH) ואני מתכוון ערכי המוגלובין corpuscular (MCV)7. המודל שלנו, אנו רואים עליות הראשונית בשני פרמטרים אלה לאחר 14 ו 30 ימים. MCV והן MCH לחזור לערכים נורמליים אחרי מעקב ארוך יותר (איור 7). זה מראה שאת למעי הגס דיסטלי לא תגרום בויטמינים משמעותיים קלינית במהלך לטווח ארוך.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig1.jpg"> איור 1: אנטומיה של אזור cecal, הליך כירורגי. (א) ייצוג גרפי של האנטומיה לאחר הניתוח. (ב) טופוגרפיה של פול פוט cecal וציוני אנטומיים. (ג) Graphical ייצוג הפתחים למעי הגס. איור 1a שונתה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig2.jpg"> איור 2: גוף פיתוח משקל. משקל הגוף מוצג כאחוז של משקל הגוף לפני הניתוח. הגוף משקל עקומות של למעי הגס, שאם לחשוף בעלי חיים (colotomy), כי הירידה במשקל לאחר הניתוח הראשוני היה גבוה באופן משמעותי בקבוצה למעי הגס לעומת הקבוצה דמה (p < 0.001). ערכים הם אמצעי ± לשגיאות תקן של הממוצע לאורך 21-26 חיות לכל קבוצה (חיות 21 התקבל colostomies; 26 בעלי החיים היו בקבוצה דמה). איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig3.jpg"> איור 3: גורם המוות. סיבוכים מיוצגים כמו אחוזי התמותה כל סיבה, מומחשים בתרשים עוגה (קבוצה למעי הגס (א), (ב) שאם קבוצה). סיבוכים לאחר הניתוח נקבעו על ידי necropsy. תסמונת לבזבז הוגדר מתמדת במשקל גדול מ- 33% של משקל הגוף הראשונית, אין ממצאים אחרים ב- necropsy. Ileus ודליפה anastomotic אובחנו ב- necropsy. פיונית סיבוכים הוגדרו אבצס peristomal והפרדות mucocutaneous בלוטת. סיבוכים אחרים מורכבת הפצע התבקעות של פתיחת בטן, איסכמיה של המעי, מקרים לא ברור בשלב זה necropsy. הבדלים משמעותיים בתחום ההפצה של סיבוכים לאחר הניתוח נראו בין קבוצות (p = 0.021, נותחה באמצעות הבדיקה המדויקת פישר לניתוח דו צדדי של עד 6 × 6 מגירה טבלאות). היו חיות 39 בקבוצה למעי הגס 29 בקבוצה המזויפים. איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig4.jpg"> איור 4: האוכלוסייה אורך ותא בגביע הקריפטה. אורך קריפטה ומספרי תא בגביע היו נחושים באמצעות פרפין מקטעים של פי הטבעת לאחר צביעת המחזורית חומצה-שיף. (א) קריפטה אורך היה ירד באופן משמעותי בתוך פי הטבעת של בעלי חיים הסחה קוליטיס (DC). (ב) האורך של אזור תא בגביע מניבי התת-קרקעי נמדד ולהגדיר כיחס באורך מלא הקריפטה. 30 ו 60 ימים במשככי, האחוז של תאי גביע קריפטה-אורך-מיסב היה ירד בקבוצה DC. (ג) וגביע תא מספרים הצטמצמו באופן משמעותי אצל בעלי חיים DC לעומת הקבוצה המזויפים. גרפים ב (א) עד (ג) מציגים אמצעי, תקן שגיאות לאורך 5 עד 9 חיות לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; שאם 30 ו 60 ימים: n = 9); ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig5.jpg"> איור 5: זקיקי הלימפה, תסנין דלקתי. (א) זקיקי הלימפה של נקודתיים מוטה ובעלי המזויפים נספרו במקטעי פרפין של החלחולת מוכתם hematoxylin ואאוזין. הגרף מציג את תקן שגיאות ואמצעים מעבר בעלי חיים 5 עד 9 לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; לשלוט 30 ו 60 ימים: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. (ב), (ג) נציג דוגמאות סעיפים של הרקטום למעי הגס (b) ובעלי דמה (ג) 60 יום במשככי מוכתם hematoxylin ואאוזין. זקיק הלימפה הבולטים (∗) היה נוכח רירית של עכבר למעי הגס. סולם העמודות מייצגות 100 מיקרומטר. (ד) ו- (e) צביעת עם chloroacetate התגובה esterase במקטעי פרפין בוצע לזהות גרנולוציטים נויטרופילים. על חתכי רוחב של החלחולת מוסחת, לחדור neutrophilic דלקתית חריפה נצפתה בקבוצה למעי הגס (d) וגם בבעלי דמה (e) עד 60 יום במשככי. סולם העמודות מייצגות 100 מיקרומטר. איור זה השתנה Kleinwort et al.6. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig6.jpg"> איור 6: ספירת נויטרופילים, טסיות. ספירת דם של דגימות דם ורידי נקבעו על ידי מנתח המטולוגיה וטרינרי. (א) ספירת נויטרופילים היו גדל באופן משמעותי בקבוצה למעי הגס בהשוואה לבעלי שאם עד 60 יום במשככי. (ב) ספירת טסיות דם היו מעט גבוהות בקבוצה למעי הגס 60 יום במשככי. הגרף מציג את תקן שגיאות ואמצעים מעבר בעלי חיים 5 עד 9 לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; שאם 30 ו 60 ימים: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig7.jpg"> איור 7: פרמטרים של תאי הדם האדומים. ספירת דם של דגימות דם ורידי נקבעו על ידי מנתח המטולוגיה וטרינרי. (א) המוגלובין ו- (ב) המטוקריט ירדו באופן משמעותי בקבוצה למעי הגס בהשוואה לקבוצת המזויפים. (ג) אבל corpuscular נפח (MCH) היה גבוה באופן משמעותי 14 ו 30 יום במשככי בקבוצה למעי הגס לעומת הקבוצה המזויפים חזר להיות תקין לאחר 60 ימים. (ד) אומר ערכי המוגלובין corpuscular (MCV) היו גבוהות לאחר 30 ימים, אבל כבר לא לאחר 60 יום במשככי בקבוצה למעי הגס בהשוואה שאם בעלי חיים. הגרף מציג את תקן שגיאות ואמצעים מעבר בעלי חיים 5 עד 9 לכל קבוצה (למעי הגס 14 ו- 30 ימים, שאם 14 ימים: n = 8; למעי הגס 60 ימים: n = 5; שאם 30 ו 60 ימים: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

מאתר למעי הגס דיסטלי מספק מודל מאתר הסחה האנושי קוליטיס, קוליטיס בעיקר לימפוציטית קטע המעי הגס נכללו הנחל צואה.

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

12.8K Views.  Universitätsmedizin Greifswald. מאתר למעי הגס דיסטלי מספק מודל מאתר הסחה האנושי קוליטיס, קוליטיס בעיקר לימפוציטית קטע המעי הגס נכללו הנחל צואה.

Video: Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal cancer (CRC) over healthy individuals. This risk is proportional to the duration and extent of disease, with a cumulative incidence as high as 30% in individuals with longstanding UC with widespread colonic involvement.1 Colonic dysplasia in IBD and colitis associated cancer (CAC) are believed to develop as a result of repeated cycles of epithelial cell injury and repair while these cells are bathed in a chronic inflammatory cytokine milieu.2 While spontaneous and colitis-associated cancers share the quality of being adenocarcinomas, the sequence of underlying molecular events is believed to be different.3 This distinction argues the need for specific animal models of CAC.
Several mouse models currently exist for the study of CAC. Dextran sulfate sodium (DSS), an agent with direct toxic effects on the colonic epithelium, can be administered in drinking water to mice in multiple cycles to create a chronic inflammatory state. With sufficient duration, some of these mice will develop tumors.4 Tumor development is hastened in this model if administered in a pro-carcinogenic setting. These include mice with genetic mutations in tumorigenesis pathways (APC, p53, Msh2), as well as mice pre-treated with genotoxic agents (azoxymethane [AOM], 1,2-dimethylhydrazine [DMH]).5 
The combination of DSS with AOM as a model for colitis associated cancer has gained popularity for its reproducibility, potency, low price, and ease of use. Though they have a shared mechanism, AOM has been found to be more potent and stable in solution than DMH. While tumor development in other models generally requires several months, mice injected with AOM and subsequently treated with DSS develop adequate tumors in as little as 7-10 weeks.6, 7 Finally, AOM and DSS can be administered to mice of any genetic background (knock out, transgenic, etc.) without cross-breeding to a specific tumorigenic strain. Here, we demonstrate a protocol for inflammation-driven colonic tumorigenesis in mice utilizing a single injection of AOM followed by three seven-day cycles of DSS over a 10 week period. This model induces tumors with histological and molecular changes closely resembling those occurring in human CAC and provides a highly valuable model for the study of oncogenesis and chemoprevention in this disease.8

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

We demonstrate a protocol in which administration of the genotoxic agent azoxymethane (AOM) followed by three cycles of the pro-inflammatory agent dextran sulfate sodium (DSS) rapidly and consistently generates colon tumors in mice with morphologic and molecular similarities to those seen in human colitis-associated cancer.

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

This protocol outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and colitis, as well as the methods used to characterize Citrobacter rodentium infection in mice. C. rodentium is a gram negative, murine specific bacterial pathogen that is closely related to the clinically important human pathogens enteropathogenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli. Upon infection with C. rodentium, immunocompetent mice suffer from modest and transient weight loss and diarrhea. Histologically, intestinal crypt elongation, immune cell infiltration, and goblet cell depletion are observed. Clearance of infection is achieved after 3 to 4 weeks. Measurement of intestinal epithelial barrier integrity, bacterial load, and histological damage at different time points after infection, allow the characterization of mouse strains susceptible to infection.
The virulence mechanisms by which bacterial pathogens colonize the intestinal tract of their hosts, as well as specific host responses that defend against such infections are poorly understood. Therefore the C. rodentium model of enteric bacterial infection serves as a valuable tool to aid in our understanding of these processes. Enteric bacteria have also been linked to Inflammatory Bowel Diseases (IBDs). It has been hypothesized that the maladaptive chronic inflammatory responses seen in IBD patients develop in genetically susceptible individuals following abnormal exposure of the intestinal mucosal immune system to enteric bacteria. Therefore, the study of models of infectious colitis offers significant potential for defining potentially pathogenic host responses to enteric bacteria. C. rodentium induced colitis is one such rare model that allows for the analysis of host responses to enteric bacteria, furthering our understanding of potential mechanisms of IBD pathogenesis; essential in the development of novel preventative and therapeutic treatments.

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium infection provides a valuable model to study enteric bacterial infections as well as host immune responses and colitis in mice. This protocol outlines the measurement of barrier integrity, pathogen load and histological damage allowing for the thorough characterization of pathogen and host contributions to murine infectious colitis.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Immunology and Infection

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Colitis can occur from viral or bacterial infections, ischemic insult, or autoimmune disorders; most notably Ulcerative Colitis and the colonic variant of Crohn&rsquo;s Disease - Crohn&rsquo;s Colitis. Acute colitis may present with abdominal pain and distention, malabsorption, diarrhea, hematochezia and mucus in the stool. We are beginning to understand the complex interactions between the environment, genetics, and epithelial barrier dysfunction in Inflammatory Bowel Disease and animal models of colitis have been essential in advancing our understanding of this disease. One popular model involves supplementing the drinking water of mice with low-molecular weight Dextran Sodium Sulfate (DSS), resulting in epithelial damage and a robust inflammatory response in the colon lasting several days 1.Variations of this approach can be used to model acute injury, acute injury followed by repair, and repeated cycles of DSS interspersed with recovery modeling chronic inflammatory diseases 2. After a single four-day treatment of 3% DSS in drinking water, mice show signs of acute colitis including weight loss, bloody stools, and diarrhea. Mice are euthanized at the conclusion of the treatment course and at necropsy dissected colons are processed and can be 'Swiss rolled" 3 to allow microscopic analysis of the entire colon or infused with formalin as "sausages" to allow macroscopic analysis. Tissue is then embedded in paraffin, sectioned, and stained for histologic review.

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium DSS

Dextran sulfate sodium (DSS) administered in the drinking water is an established murine inflammatory injury model of acute colitis. This protocol outlines the method for DSS treatment and the preparation of tissues.

קוליטיס דוגמנות Murine באמצעות נתרן dextran סולפט (DSS)

Colitis can occur from viral or bacterial infections, ischemic insult, or autoimmune disorders; most notably Ulcerative Colitis and the colonic variant of ...

Biology

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of colonic surgeries and can occur in up to 26% of surgical anastomoses, with mortality being up to 39% for patients with such a leak. Currently, there remains a paucity of data detailing the cellular mechanisms of anastomotic healing. Devising preventative strategies and treatment modalities for anastomotic leak could be greatly potentiated by a better understanding of appropriate anastomotic healing.
A murine model is ideal as previous studies have shown that the murine anastomosis is the most clinically similar to the human case as compared with other animal models. We offer an easily reproducible murine model of colonic anastomosis in mice that will allow for further illustration of anastomotic healing.

Anastomotic leak or breakdown after surgery is a major cause of postoperative morbidity and mortality. Our surgery for creating a colonic anastomosis is a reliable and reproducible method for studying the healing mechanisms of anastomoses.

יצירה של השקה שטיפת המעי הגס בעכברים

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

<meta charset="utf8"></head><body>מודל מורין לחקר אילאוס לאחר הניתוח באמצעות מניפולציה במעיים

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

מעקף Duodeno-Ileal יחיד Anastomosis עם שרוול Gastrectomy דגם בעכברים

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

קוליטיס דוגמנות Murine באמצעות נתרן dextran סולפט (DSS)

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

יצירה של השקה שטיפת המעי הגס בעכברים

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

מעקף Duodeno-Ileal יחיד Anastomosis עם שרוול Gastrectomy דגם בעכברים