הכותבים הם עובדי Miltenyi BIOTEC GmbH, גרמניה.

כדי לעבוד בתנאים סטריליים, מומלץ לבצע את כל השלבים ברדס זרימה למינרית. 1. חומרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HEPES חיץ: 10 mM HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, KCl 5 mM, 1 mM MgCl 2, 1.8 mM CaCl 2) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Collagenase פתרון D: collagenase D: 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​(collagenase D&gt; 0.15 U / מ&quot;ג), ב HEPES חיץ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DNase פתרון אני: 20,000 U / mL DNase אני </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBS חוצץ ב-pH 7.2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PEB חיץ: 1 חלק BSA במלאי פתרון ב 20 חלקים autoMACS פתרון שטיפה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות: ריאות הנגזרות 6 / 7 שבוע הישן נקבה בוגרת BALB / C העכבר, ללא איברים סמוכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: microbeads CD11c, MACS עמודות MS, MACS מפריד עבור בידוד של תאים דנדריטים מן ההשעיה ריאות תא בודד העכבר </li></ol> 2. Dissociating רקמת הריאה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את רקמת בצלחת פטרי המכילות PBS להסיר אריתרוציטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה מרבי של רקמת הריאה עד 450 מ&quot;ג Tube gentleMACS C המכיל 4.9 מ&quot;ל HEPES חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 100 μL פתרון D collagenase לריכוז סופי של 2 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​collagenase ד </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 פתרון μL DNase אני בעד רקמה 150 מ&quot;ג (הריכוז הסופי של 40 U / ml DNase אני) או 20 μL DNase אני עבור רקמת הריאה 150-450 מ&quot;ג (הריכוז הסופי של 80 U / mL DNase אני). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזק לסגור את Tube C וצרף אותו על Dissociator gentleMACS. ואז להפעיל את התוכנית &quot;m_lung_01&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה למשך 30 דקות ב 37 מעלות עם סיבוב אוטומטי או ידני להפוך כל 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור מדגם Dissociator gentleMACS ולהפעיל את התוכנית &quot;m_lung_02&quot;. </li></ol> 3. סינון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן צינורית 50 מ&quot;ל לאיסוף תאים מסוננים על ידי החלפת מכסה עם מסננת רשת 70 מיקרומטר התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תוכנית second gentleMACS מסתיים, בהתאם לחלוקת חומר מדגם בצינור, ייתכן צנטריפוגות הצינור קצר כדי לאסוף את החומר מדגם בחלק התחתון של הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את התאים באמצעות כובע חתום של מחצה התחתית C באמצעות קצה מתאים 1000 פיפטה μl ולהחיל אותן על מסננת את התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את מסננת תא עם חיץ HEPES 5 מ&quot;ל ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה את התאים גלולה בצינור 50 מ&quot;ל ב 300xg במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant ו resuspend התא גלולה בהיקף הרצוי מאגר PEB. </li></ol> חלק 4: תוצאות נציג: <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. הביאה ריאות דיסוציאציה עם ™ gentleMACS Dissociator בתאים קיימא 92%. תאים מתים היו מוכתמים fluorescently עם יודיד propidium (PI) (העלילה נקודה הנכונה; העלילה נקודה שמאל: לא מכתים PI). <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. דיסוציאציה של רקמת הריאה באמצעות העכבר את התוצאות Dissociator gentleMACS באחוז גבוה של לויקוציטים לתאי אנדותל קיימא. נגזר תא בודד השעיות הוכתמו CD45-PE ו-CD146 FITC או CD31-FITC ונותחו על ידי cytometry הזרימה. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266figure2c.png" alt="איור 2C" /> איור 3. תא בודד ההשעיה נבעה רקמת הריאה העכבר היה מוכתם CD11c-FITC ואנטי mPDCA-1-APC לאתר עכבר CD11c נמוך מ-PDCA-1 + DCs plasmacytoid כמו גם תאים גבוה CD11c. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. והעשרה של תאים דנדריטיים באמצעות microbeads CD11c, מפריד MiniMACS ושני טורים MS.

<ol>
	<li>Swanson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flt3-Ligand,+IL-4,+GM-CSF,+and+Adherence-Mediated+Isolation+of+Murine+Lung+Dendritic+Cells:+Assessment+of+Isolation+Technique+on+Phenotype+and+Function.">Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function.</a> J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).</li><li>Vermaelen, K., Pauwels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+and+simple+discrimination+of+mouse+pulmonary+dendritic+cell+and+macrophage+populations+by+flow+cytometry:+Methodology+and+new+insights.">Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights.</a> Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).</li></ol>

The authors are employees of Miltenyi Biotec GmbH who make the instrument used in this article.

בסרטון הזה, אנו מציגים שיטה חדשה דיסוציאציה של רקמת הריאה העכבר. אנו מראים כי שילוב של טיפול מכני האנזימטית של רקמת הריאה הניבו אחוז גבוה של לויקוציטים לתאי אנדותל קיימא. באופן ספציפי, התפוררות מכנית של רקמת הושגה על ידי Dissociator gentleMACS. C צינורות gentleMACS כוללים הרוטור - מערכת הסטטור, אשר מנתק רקמות בצורה עדינה. הליך זה נשלט על ידי הגדרות התוכנית של המכשיר. ההגדרות היו אופטימיזציה כדי להשיג תשואה גבוהה הכדאיות של תאים. נגזר תא בודד השעיות הוכתמו CD45-PE ו-CD146 FITC או CD31-FITC ונותחו על ידי זרימת cytometry לזהות לויקוציטים ותאי האנדותל. תאים דנדריטים ההשעיה מתא בודד הוכתמו CD11c-FITC ואנטי mPDCA-1-APC. יתר על כן, תאים דנדריטים מן השעיה ריאות תא בודד עכבר היו מועשר באמצעות טכנולוגיה MACS:. תאים דנדריטים תויגו מגנטית באמצעות microbeads CD11c ומופרד באמצעות מפריד MiniMACS ועמודות MS 1,2 ככלל, שילוב של ניתוק החדש שלנו עם פרוטוקול מיון התא המגנטי מייצג שיטה סטנדרטית להשיג סוגי תאים מסוימים של רקמת הריאות.

<table><tbody><tr><td>C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Starting Kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; Rinsing Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; BSA Stock Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order No. 130-052-001</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c-FITC, CD11c-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-092-026130-091-830</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-mPDCA-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-091-963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD146-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-092-026</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD45-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-091-610</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Propidium Iodide Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Order no. 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Art 1000 Reach Pipet Tips</td><td>Molecular BioProducts</td><td>Order no. 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

standardized preparation of single-cell suspensions from mouse lung tissue using the gentlemacs dissociator

הכנת תא בודד השעיות מרקמות היא תנאי חשוב ניסויים רבים במחקר הסלולר. תהליך dissociating איברים שלם דורש פרמטרים ספציפיים על מנת לקבל מספר גבוה של תאים חיים בצורה לשחזור. Dissociator gentleMACS מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. המכשיר מכיל מתוכנתים מראש הגדרות מותאמות דיסוציאציה היעילה אך עדין של מגוון רחב של סוגי רקמות, כולל הריאות העכבר. בפרסום זה השימוש Dissociator gentleMACS על רקמת הריאה נגזר עכברים מודגם.

Watch this Scientific Journal Video about Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Dissociating תאים סוגי רקמות ספציפיות דורש פרמטרים ספציפיים תסיסה רקמות לקבל כמות גדולה של תאים קיימא culturable. GentleMACS Miltenyi dissociator מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. בפרסום זה השימוש במנגנון הזה על רקמת הריאות הוא הסביר.

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

standardized-preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-lung

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

34.5K Views.  Miltenyi Biotec,GmbH.  中文 日本語 

Video: Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the respiratory tract. At least three main subsets of lung dendritic cells have been described in mice: conventional DC (cDC) 4, plasmacytoid DC (pDC) 5 and the IFN-producing killer DC (IKDC) 6,7. The cDC subset is the most prominent DC subset in the lung 8. 
The common marker known to identify DC subsets is CD11c, a type I transmembrane integrin (&beta;2) that is also expressed on monocytes, macrophages, neutrophils and some B cells 9. In some tissues, using CD11c as a marker to identify mouse DC is valid, as in spleen, where most CD11c+ cells represent the cDC subset which expresses high levels of the major histocompatibility complex class II (MHC-II). However, the lung is a more heterogeneous tissue where beside DC subsets, there is a high percentage of a distinct cell population that expresses high levels of CD11c bout low levels of MHC-II. Based on its characterization and mostly on its expression of F4&#47;80, an splenic macrophage marker, the CD11chiMHC-IIlo lung cell population has been identified as pulmonary macrophages 10 and more recently, as a potential DC precursor 11. 
In contrast to mouse pDC, the study of the specific role of cDC in the pulmonary immune response has been limited due to the lack of a specific marker that could help in the isolation of these cells. Therefore, in this work, we describe a procedure to isolate highly purified mouse lung cDC. The isolation of pulmonary DC subsets represents a very useful tool to gain insights into the function of these cells in response to respiratory pathogens as well as environmental factors that can trigger the host immune response in the lung.

A highly purified preparation of mouse lung dendritic cells is described. Specific emphasis is given to the isolation of conventional dendritic cell subset.

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Immunology and Infection

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual dissociations the gentleMACS Dissociator allows one to dissociate tissue very efficiently under controlled and reproducible conditions.  The gentleMACS Dissociator can optimally dissociate mouse spleen, combining timesaving and standardization with user-safety.

This video describes how to dissociate mouse spleens using the gentleMACS Dissociator, an automated bench-top device that can mechanically disrupt tissues using special tubes to produce viable cell suspensions. Following dissociation, spleens are filtered, centrifuged, and resuspended for further applications.

This video describes a simple, time-saving technique for automated tissue dissociation using the gentleMACS Dissociator to prepare single-cell suspensions of mouse splenocytes.

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a repertoire of cell surface molecules, or molecular determinants, through which it can be identified and characterized. Currently, robust cell identification and separation technologies require single-cell preparations to be generated while simultaneously limiting cell death and destruction of characteristic surface protein. The gentleMACS Dissociator, when used in combination with trypsin or papain-based dissociation kits, can effectively and gently dissociate brain tissue while preserving antigen epitopes and limiting cell loss. Standardized preparation of single-cell suspensions is achieved using C Tubes and optimized, preset gentleMACS Programs. Once generated, single-cell suspensions can be treated with monoclonal conjugates like Anti-Prominin-1 MicroBeads, which identify neural progenitors, or purified further using Myelin Removal Beads.

Dissociating cells from specific tissue types requires specific parameters for tissue aggitation to obtain a high volume of viable, culturable cells. The Miltenyi gentleMACS Dissociator optimizes this task with a simple, practical protocol. In this publication the use of this apparatus on nerual tissue is explained.

הדור של תא בודד מרקמת השעיות עכבר עצבית

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and their important role in lung development and function, as well as their lung-localized responses to infection and inflammation. To date, no unified method for identification, isolation, and handling of alveolar macrophages from humans and mice exists. Such a method is needed for studies on these important innate immune cells in various experimental settings. The method described here, which can be easily adopted by any laboratory, is a simplified approach to harvesting alveolar macrophages from bronchoalveolar lavage fluid or from lung tissue and maintaining them in vitro. Because alveolar macrophages primarily occur as adherent cells in the alveoli, the focus of this method is on dislodging them prior to harvest and identification. The lung is a highly vascularized organ, and various cell types of myeloid and lymphoid origin inhabit, interact, and are influenced by the lung microenvironment. By using the set of surface markers described here, researchers can easily and unambiguously distinguish alveolar macrophages from other leukocytes, and purify them for downstream applications. The culture method developed herein supports both human and mouse alveolar macrophages for in vitro growth, and is compatible with cellular and molecular studies.

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

This communication describes methodologies for isolation and culture of alveolar macrophages from humans and murine models for experimental purposes.

בידוד והתרבות במבחנה של מקרופאגים מכתשי מאתר ואנושי

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor formation. Taken together these studies suggest that resident lung MSC play a role during pulmonary tissue homeostasis, injury and repair during diseases such as pulmonary fibrosis (PF) and arterial hypertension (PAH). Here we describe a technology to define a population of resident lung MSC. The definition of this population in vivo pulmonary tissue using a define set of markers facilitates the repeated isolation of a well-characterized stem cell population by flow cytometry and the study of a specific cell type and function.

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

In this article we demonstrate the isolation of murine resident lung mesenchymal stem cells (lung MSC), their expansion, characterization and analysis of immunomodulatory properties.

בידוד &amp; אפיון Hoechst נמוך CD45 שלילי עכבר mesenchymal ריאות בתאי גזע

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

דיסוציאציה חצי אוטומטית של רקמות מכניות-אנזימטיות לאנליזה של תא בודד

Mechanical Dissociation of Tissues for Single Cell Analysis Using a Motorized Device

Being able to isolate and prepare single cells for the analysis of tissue samples has rapidly become crucial for new biomedical discoveries and research. Manual protocols for single-cell isolations are highly time-consuming and prone to user variability. Automated mechanical protocols are able to reduce processing time and sample variability but aren't easily accessible or cost-effective in lower-resourced research settings. The device described here was designed for semi-automated tissue dissociation using commercially available materials as a low-cost alternative for academic laboratories. Instructions to fabricate, assemble, and operate the device design have been provided. The dissociation protocol reliably produces single-cell suspensions with comparable cell yields and sample viability to manual preparations across multiple mouse tissues. The protocol provides the ability to process up to 12 tissue samples simultaneously per device, making studies requiring large sample sizes more manageable. The accompanying software also allows for customization of the device protocol to accommodate varying tissues and experimental constraints.

מחבר זרקור: התקדמות בטכנולוגיית ננו-חלקיקים למתן תרופות ואימונותרפיה

A general protocol for the combined enzymatic and semi-automated mechanical dissociation of tissues to generate single-cell suspensions for downstream analyses, such as flow cytometry, is provided. Instructions for the fabrication, assembly, and operation of the low-cost mechanical device developed for this protocol are included.

דיסוציאציה מכנית של רקמות לאנליזה של תא בודד באמצעות מכשיר ממונע

Being able to isolate and prepare single cells for the analysis of tissue samples has rapidly become crucial for new biomedical discoveries and research. ...

Bioengineering

בידוד ואפיון תאי T ספציפיים לאנטיגן בריאות עכבר

Identification of Rare Antigen-Specific T Cells from Mouse Lungs with Peptide:Major Histocompatibility Complex Tetramers

The identification and characterization of antigen-specific T cells during health and disease remains a key to improving our understanding of immune pathophysiology. The technical challenges of tracking antigen-specific T cell populations within the endogenous T cell repertoire have been greatly advanced by the development of peptide:MHC tetramer reagents. These fluorescently labeled soluble multimers of MHC class I or class II molecules complexed to antigenic peptide epitopes bind directly to T cells with corresponding T cell receptor (TCR) specificity and can, therefore, identify antigen-specific T cell populations in their native state without a requirement for a functional response induced by ex vivo stimulation. For exceedingly rare populations, tetramer-bound T cells can be magnetically enriched to increase the sensitivity and reliability of detection.
As the investigation of tissue-resident T cell immunity deepens, there is a pressing need to identify antigen-specific T cells that traffic to and reside in nonlymphoid tissues. In this protocol, we present a detailed set of instructions for the isolation and characterization of antigen-specific T cells present within mouse lungs. This involves the isolation of T cells from digested lung tissue followed by a general T cell magnetic enrichment step and tetramer staining for flow cytometry analysis and sorting. The steps highlighted in this protocol utilize common techniques and readily available reagents, making it accessible for nearly any researcher engaged in mouse T cell immunology, and are highly adaptable for a variety of downstream analyses of any low frequency antigen-specific T cell population residing within the lungs.

Author Spotlight: פרוטוקול ממוטב לאיתור תאי T ספציפיים לאנטיגן בריאות עכבר באמצעות טטרמרים

We provide a detailed protocol for isolating and identifying rare antigen-specific T cell populations in mouse lungs through magnetic bead-based T cell enrichment and peptide:major histocompatibility complex (MHC) tetramers.

זיהוי תאי T נדירים ספציפיים לאנטיגן מריאות עכבר באמצעות פפטיד:טטרמרים מורכבים עיקריים של היסטותאימות

The identification and characterization of antigen-specific T cells during health and disease remains a key to improving our understanding of immune ...

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS

Transcript

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

הדור של תא בודד מרקמת השעיות עכבר עצבית

בידוד והתרבות במבחנה של מקרופאגים מכתשי מאתר ואנושי

בידוד & אפיון Hoechst^נמוך CD45^שלילי עכבר mesenchymal ריאות בתאי גזע

דיסוציאציה מכנית של רקמות לאנליזה של תא בודד באמצעות מכשיר ממונע

דיסוציאציה מכנית של רקמות לאנליזה של תא בודד באמצעות מכשיר ממונע

דיסוציאציה מכנית של רקמות לאנליזה של תא בודד באמצעות מכשיר ממונע

זיהוי תאי T נדירים ספציפיים לאנטיגן מריאות עכבר באמצעות פפטיד:טטרמרים מורכבים עיקריים של היסטותאימות

זיהוי תאי T נדירים ספציפיים לאנטיגן מריאות עכבר באמצעות פפטיד:טטרמרים מורכבים עיקריים של היסטותאימות