Notre protocole décrit une intervention chirurgicale pour enlever les bandes aortiques ascendantes dans un modèle de rat d’hypertension pulmonaire due à une maladie cardiaque gauche, ce qui conduit à l’inversion de l’hypertension pulmonaire. Cette technique présente un outil précieux pour étudier les mécanismes de remodelage physiologique inverse dans la circulation pulmonaire et le ventricule droit. Il peut aider à développer des stratégies pour traiter l’hypertension pulmonaire.
Une fois les instruments chirurgicaux préparés, placez un rat anesthésié en position couchée sur une table chirurgicale stérilisée. Ensuite, fixez l’abdomen et les membres de l’animal avec un ruban adhésif et désinfectez la peau de l’animal avec une solution de povidone-iode / iodophor. Notez les cicatrices et les sutures de la chirurgie primaire de bande aortique, ou AoB.
Après avoir assuré une profondeur adéquate de l’anesthésie avec pincement des orteils, retirez les sutures de la chirurgie AoB primaire. Ensuite, effectuez une trachéotomie en faisant une incision cervicale médiane de 7 à 10 millimètres de long avec de fins ciseaux. À l’aide d’une paire de pinces contondantes, disséquez les tissus mous cervicaux pour exposer les muscles infrahyoïdes.
Ensuite, en divisant les muscles de la ligne médiane, visualisez la trachée. Lorsque cela est fait, faites une incision de trachée de deux millimètres entre deux anneaux cartilagineux à l’aide de ciseaux à ressort Noyes inclinés pour insérer la canule trachéale de diamètre extérieur de deux millimètres dans la trachée. Ensuite, fixez la canule avec une suture de soie 4-0.
Connectez l’autre extrémité de la canule trachéale à un ventilateur mécanique tout en gardant l’espace mort minimum. Maintenir la ventilation pulmonaire périopératoire à une fréquence respiratoire de 90 respirations par minute à un volume courant de 8,5 millilitres par kilogramme de poids corporel. Pour le débandage aortique, faites une incision cutanée de 20 millimètres de long entre la deuxième et la troisième côte à l’aide de ciseaux fins.
À l’aide de ciseaux chirurgicaux plus petits, étalez et coupez les muscles couche par couche, puis faites une incision latérale de 10 millimètres le long de l’espace intercostal entre la deuxième et la troisième côte. Utilisez un épandeur de côtes pour élargir l’espace intercostal entre la deuxième et la troisième côte, afin de créer une fenêtre chirurgicale. À l’aide de pinces contondantes, séparez le thymus du cœur et conduisez les artères pour visualiser l’aorte avec le clip.
Tenez le clip à l’aide de la pince, puis retirez le tissu conjonctif autour du clip pour exposer l’aorte. Ouvrez le clip avec un porte-aiguille et retirez le clip de la cavité thoracique. Avant de fermer la poitrine, ouvrez l’atélectasie pulmonaire et assurez-vous d’un recrutement pulmonaire adéquat sans surdistension avec une ventilation mécanique, avec un volume courant de 9,5 millilitres par kilogramme de poids corporel pendant 10 minutes, et revenez à un volume courant de 8,5 millilitres par kilogramme de poids corporel.
Plus tard, fermez les muscles profonds par une simple suture interrompue à l’aide de soie 4-0 et connectez les muscles supérieurs avec une simple suture continue. Ensuite, fermez la peau avec une simple suture continue. Débranchez la canule trachéale de la machine de ventilation tout en observant le rat pour une respiration spontanée.
Si l’animal ne respire pas spontanément lors de la déconnexion, reconnectez le ventilateur et continuez à ventiler pendant cinq minutes supplémentaires avant de répéter la procédure. Une fois la respiration spontanée rétablie, retirez la canule de la trachée et nettoyez le liquide autour de la trachée avec des pointes d’éponge. Fermez la trachée avec une suture simple à l’aide de 6-0 Prolene, et fermez les muscles infrahyoïdes dans une suture interrompue simple en utilisant de la soie 4-0.
Connectez la peau dans une simple suture continue, suivie d’un nettoyage et d’une désinfection des muscles et de la peau avec une solution de povidone-iode / iodophore. Après avoir terminé l’intervention chirurgicale, déplacez un seul animal dans une cage de récupération avec de l’oxygène supplémentaire et une lampe infrarouge, puis placez le masque à oxygène près du museau du rat. Dans l’étude, la position du clip sur l’aorte ascendante chez les animaux AoB et son absence après la chirurgie de débandage, ou Deb, ont été visualisées.
En outre, le flux sanguin aortique a été évalué par imagerie Doppler à ondes pulsées avant et après le clip chez les animaux AoB avant le débandage et dans les segments aortiques correspondants après la chirurgie de Deb. Les résultats ont montré une atténuation marquée du gradient de flux sanguin en ligne avec le débandage fonctionnel. À la cinquième semaine, les rats Deb ont exprimé le peptide natriurétique cérébral, ou BNP, à des niveaux comparables à ceux des animaux simulés, indiquant l’inversion de l’échec du ventricule gauche, ou LV, par le dégroupage aortique.
L’évaluation de la fonction LV par échocardiographie transthoracique a révélé une augmentation de la fraction d’éjection LV et du volume LV chez les animaux Deb par rapport aux rats AoB. La chirurgie de dégroupage effectuée à la troisième semaine après AoB a entraîné une réduction significative de la pression systolique ventriculaire gauche et une hypertrophie LV par rapport aux animaux AoB. Par rapport aux rats AoB à la troisième semaine et à la cinquième semaine, les animaux Deb ont également montré une réduction significative de la pression systolique ventriculaire droite et de l’hypertrophie ventriculaire droite, démontrant une inversion réussie de l’hypertension pulmonaire due à une maladie cardiaque gauche.
Les étapes les plus critiques de cette procédure sont le retrait du clip et le recrutement du poumon après le débandage aortique. Ces étapes, lorsqu’elles sont correctement effectuées, augmentent la survie des animaux.
