Thromboelastography et analyses de turbidité sont deux méthodes simples et distinctives pour la caractérisation de caillot. Ensemble, ces techniques offrent une compréhension plus complète de l’impact des variables de coagulation sur les caractéristiques des caillots. Ces deux analyses, non seulement offrent l’analyse de caillot de point final mais attirent également la formation fibrine de caillot au fil du temps, contrairement à beaucoup d’autres outils de caractérisation de caillot Ces techniques peuvent aider à développer une plate-forme synthétique physiologiquement pertinente de caillot qui peut fournir le diagnostic fiable de l’état fibrinolytique des patients de thrombose pour surveiller la turbidité de caillot au fil du temps, employer n’importe quel spectromètre commercialement disponible qui a une gamme d’absorption de 350 à 700 nanomètres.
Allumez le spectromètre et ouvrez le logiciel d’analyse correspondant. Sélectionnez ensuite la première plaque et ouvrez l’onglet paramètres de la plaque. Cliquez sur ABS et cinétique pour surveiller une absorption dynamique au fil du temps.
Sélectionnez 550 nanomètres dans l’onglet longueur d’onde, puis passez à l’onglet timing et ajustez le temps d’exécution total à 60 minutes avec un intervalle de 30 secondes, sélectionnez les puits d’intérêt en les mettant en évidence. Pipette 140 microlitres de PBS dans un puits d’une plaque de puits uv transparente 96. Ajouter ensuite 10 microlitres de thrombine et mélanger, lancer immédiatement la coagulation en ajoutant 50 microlitres de fibrinogène au puits et pipette de haut en bas cinq fois en utilisant seulement le premier arrêt de la pipette en prenant soin d’éviter de créer des bulles.
Placez la plaque dans le porte-plaques et cliquez sur lire dans le logiciel pour commencer la lecture de turbidité. Lorsque la lecture a fini de récupérer les données de turbidité et d’obtenir une courbe de traçage de turbidité en traçant le changement absorbants au fil du temps, tirer une turbidité maximale en prenant la valeur d’absorption maximale de la courbe au fil du temps, puis calculer 90% turbidité maximale en multipliant la turbidité maximale par 0,9. Tirez le temps à la turbidité maximale en calculant le temps de l’initiation de caillot à 90% turbidité maximale.
Allumez la thromboelastographie ou l’analyseur TEG, et attendez que la température se stabilise à 37 degrés Celsius, puis ouvrez le logiciel TEG et créez un nom d’expérience sous la section ID. Cliquez sur l’onglet TEG et suivez les invites à l’écran pour effectuer un test eTest pour tous les canaux. Ensuite, placez le levier à la position de charge une fois toutes les vérifications terminées.
Cliquez sur la page d’information et entrez l’exemple d’information pour les canaux qui seront utilisés. Placez une tasse TEG claire non encolée dans son canal correspondant. Faites glisser le support vers le haut et appuyez cinq fois sur le fond de la tasse pour fixer la goupille à la tige de torsion, puis abaissez le support et appuyez sur la tasse vers le bas dans la base jusqu’à ce qu’elle clique.
Pipette 20 microlitres de solution thrombine dans la tasse TEG, puis initier la coagulation en ajoutant 340 microlitres de fibrinogène dans la tasse pour obtenir une solution de coagulation de 360 microlitres. Mélangez le contenu de la tasse en faisant monter et descendre cinq fois. Faites glisser le transporteur chargé de tasse vers le haut déplacez le levier à la position de lecture et cliquez sur démarrer dans le logiciel pour lancer la lecture de TEG.
Une fois la lecture terminée, récupérez les paramètres et obtenez une courbe de traçage TEG en traçant l’amplitude au fil du temps. Elect MA comme amplitude maximale, ce qui est indicatif de la tension du caillot et TMA comme temps à l’amplitude maximale du logiciel. Une turbidité représentative et un TEG retraçant les courbes des caillots de fibrine humains et bovins à différents niveaux de fibrinogène sont montrés ici.
Les courbes de traçage démontrent qu’après une période de décalage suivant l’initiation du caillot, la turbidité des caillots ou l’amplitude des caillots augmente avec le temps et s’agenouille à la fin de la formation du caillot. La turbidité maximale et le temps à la turbidité maximale sont les deux paramètres dérivés de la turbidité, tandis que l’amplitude maximale et le temps à l’amplitude maximale sont dérivés de TEG. À un niveau plus élevé de fibrinogen dans la solution de coagulation, les quatre valeurs augmentent.
La turbidité maximale est une mesure optique de la structure du caillot, qui est indicative de l’épaisseur de la fibre fibrine et de la densité du réseau fibrine. Bien que l’amplitude maximale soit une mesure mécanique qui reflète la tension absolue des caillots, prises ensemble, les deux valeurs fournissent un aperçu complémentaire des micro-structures des caillots. Cette procédure démontre un modèle simplifié de coagulation pour examiner les variables qui affectent principalement la polymérisation fibrine.
Ce modèle peut être personnalisé par l’inclusion de facteurs de coagulation supplémentaires pour étudier d’autres paramètres. Le modèle de coagulation peut être facilement modifié à l’aide d’échantillons cliniques de plasma pour surveiller la formation de caillots et la désillusion en présence de médicaments antithrombotiques. Les résultats pourraient guider la gestion thérapeutique chez les patients.
