Notre modèle de vessie avec un muscle détrusor enlevé est une nouvelle approche expérimentale pour étudier simultanément la disponibilité des médiateurs urothelial dans le propria de lamia et le lumen de réservoir souple pendant le remplissage de réservoir souple. Ce modèle peut fournir de nouvelles idées sur les mécanismes de signalisation entre l’urothelium, le sous-urothélium et le muscle du détrusor qui régulent l’excitabilité de la vessie pendant le remplissage. Commencez par placer l’échantillon intact de vessie murine dans un plat disséquant sous un microscope de dissection contenant 10 degrés Celsius oxygéné KBS et nettoyant les tissus conjonctifs et adipeux autour de la vessie.
Épinglez une petite partie du dôme de la vessie isolée jusqu’au bord externe du muscle du détruseur loin du bord le plus intime du muscle qui fait face à la propria de lamia suburothélium à un plat de dissecting couvert de sylgard rempli de KBS, et épinglez les uretères et le col de la vessie pour afficher la préparation intacte de la vessie. À l’aide de forceps à pointe fine, tirez doucement un morceau de la serosa au coin entre l’uretret et le corps de la vessie et ajustez la lumière du microscope pour augmenter la transparence et distinguer la marge de la submucosa sous le muscle du détruseur. Pour éviter de perforer la paroi de préparation, assurez-vous de couper le muscle du détruseur seulement pendant que le bord latéral de la muqueuse vésicale est clairement visible.
À l’aide de ciseaux à pointe fine, commencer à couper la paroi de la vessie le long de la surface intérieure de la couche musculaire du détruseur tout en tirant doucement le segment coupé loin de la préparation en prenant soin que le bord latéral de la muqueuse peut être observé tout en évitant de toucher le bord du tissu. Laissez un petit morceau du muscle du détrusor sur le dessus du dôme de la vessie pour permettre à la préparation d’être immobilisée pendant les étapes restantes du protocole et remplir un morceau de deux centimètres de 20 tubes en polyéthylène avec 37 degrés Celsius oxygéné KBS. Après avoir inséré le cathéter dans l’orifice de l’urètre vésical, poussez doucement le cathéter jusqu’à ce que la pointe du cathéter atteigne le milieu approximatif de la vessie.
Ensuite, fixez le cathéter dans le tissu environnant du cou de la vessie avec une double boucle 6.0 suture en nylon. Après avoir vérifié les fuites dans le tissu, placez la préparation de la vessie dénudée dans une chambre de trois millilitres de plat d’organe en veste d’eau de 37 degrés Celsius avec un fond sylgard et fixez le cathéter sur le côté de la chambre afin que la préparation ne flotte pas au-dessus de la surface de la solution de perfusion. Connectez le cathéter de la vessie à un morceau de tube en polyéthylène 20 relié à un robinet à trois sens et à une seringue d’infusion remplie de KBS oxygéné à 37 degrés Celsius et démarrez la pompe à perfusion pour remplir la vessie avec KBS en prenant soin de surveiller le volume de remplissage dans la pression intravesical pendant le remplissage.
Pour détecter les médiateurs dans l’aspect suburothélium lamina propria de la préparation, recueillir des aliquots de la solution de bain à divers moments expérimentaux appropriés et traiter les échantillons selon l’analyse en aval prévue. La paroi de préparation de la vessie dénudée contient l’urothelium et le suburothélium, mais pas le muscle lisse du détrusor. Les relations de volume de pression sont remarquablement semblables dans les préparations intactes et dénudées.
L’adéquation du modèle pour mesurer les médiateurs dérivés de l’urothelium qui sont libérés dans le côté suburothélium lamina propria pendant le remplissage peut être testée en mesurant la libération de médiateurs purins dans la solution baigner les propria suburothélium lamina de la préparation dénudée. Comme démontré, des quantités négligeables de purines peuvent être détectées dans un bain contenant une préparation isolée de la vessie avec un muscle détrusor intact; tandis que les quantités de ces purines sont significativement plus élevées dans les échantillons prélevés dans le bain contenant une préparation de vessie dénudée. Notamment, la distribution de purines et de métabolites dans les échantillons prélevés dans le lumen et le suburothélium lamina propria à la fin du remplissage diffèrent considérablement.
L’ajout d’atheno ATP, un analogue très fluorescent de l’ATP, au côté suburothélial de la préparation sans détrusor se traduit par une diminution de l’ATP atheno et une augmentation des produits ATP atheno, atheno ADP, atheno AMP, et atheno ADO. De même, l’ajout de l’ATP atheno à la préparation lumen entraîne une diminution de l’ATP atheno et une augmentation de l’ATHeno ADP, atheno AMP, et atheno ADO dans le lumen. En outre, l’ajout de l’ATP atheno au côté suburothelium lamina propria de la préparation dénudée entraîne l’apparition de l’AMP atheno et atheno ADO dans le lumen.
De même, l’ajout d’atheno ATP au lumen entraîne l’apparition de l’AMP atheno et de l’athéno ADO dans le suburothelium lamina propria. Après cette procédure, la disponibilité des médiateurs excitateurs et inhibiteurs peut être mesurée au propria de lamine et dans le lumen de réservoir souple à différents stades du remplissage de réservoir souple. Le transport transurétral bilatéral des médiateurs et le métabolisme des médiateurs peuvent également être étudiés à l’aide de ce modèle.
L’utilisation de ce nouveau modèle de vessie permettra de mieux comprendre la signalisation mécanosensible locale intrinsèque entre l’urothelium et le muscle lisse du détrusor qui contrôlent l’excitabilité de la vessie dans la santé et la maladie.
