Fonds de démarrage à A. Dickinson engagement soutenu ce travail. Les auteurs tiennent à remercier Dan Nacu pour son talent artistique dans la création de la représentation schématique.

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Les auteurs ont rien à divulguer.

Xenopus laevis est devenu un outil utile pour disséquer les mécanismes de développement de développement oro-facial sous-jacent; Cependant, il n&#39;y a actuellement aucun protocole décrivant taille et la forme des changements de cette région chez les grenouilles. La méthode décrite ici contribuera de manière significative dans le domaine du développement oro-faciale en permettant une quantification plus rigoureuse des phénotypes oro-faciales chez le xénope et autres vertébrés. Le premier aspect, le plus important de bien l&#39;exécution de ce protocole est la capacité de mesurer les dimensions du visage et déterminer l&#39;emplacement de point de repère à la fois précise et reproductible. À cette fin, il est crucial que les visages embryonnaires être photographiés avec le même angle, la direction et le grossissement. Un soin particulier doit être pris pour obtenir des mesures précises de la longueur du museau, comme il est difficile de manipuler des embryons latéralement et atteindre placement uniforme. Avoir une seule personne effectue toutes les mesures sur les sjour ame minimise ce type d&#39;erreur, tout en maximisant la reproductibilité des résultats. Le deuxième aspect le plus critique de garantir de bons résultats est la réduction de la variabilité inutile, comme les différences de développement ou fond génétique. Ceci est particulièrement important lors de l&#39;évaluation de la signification statistique entre les défauts subtils. Embryons, donc, doivent être au même stade lors d&#39;un traitement et photographié. En outre, il convient de veiller à ce taux de développement sont équivalentes entre et parmi les groupes de traitement. Pour réduire ces problèmes à la variabilité, assurez-vous que tous les embryons sont de mêmes parents et sont appariés scène au début de l&#39;expérience. Également de réduire la variabilité des sources externes de différentes sources telles que tampons et des volumes, des nombres différents d&#39;embryons, et de la répartition dans les boîtes de culture (par exemple, empêcher l&#39;encombrement). Une étape clé dans l&#39;évaluation des changements de forme par le biais de la morphométrie géométrique est le alignment de repère coordonnées via Procuste ajustement. Par application de l&#39;algorithme mathématique, aucune information sur la taille ou les différences de rotation de l&#39;image est supprimée. La matrice de covariance généré par la suite détermine les corrélations non normalisés de repère coordonnées entre tous les embryons dans l&#39;ensemble de données, sur lequel multivariée techniques- statistique tels que composante principale ou une fonction discriminante analyses- peut être effectuée. Une analyse en composantes principales (ACP) réduit un échantillon complexe à un ensemble plus restreint de variables appelées composantes principales 26. Représente la première composante de la variance plus dans l&#39;ensemble de l&#39;échantillon, avec chaque composante subséquente représente le reste. En traçant les deux premières composantes les unes contre les autres logiciels morphométrique aide, les échantillons qui sont les plus semblables se regroupent. De cette manière, l&#39;APC discrimine groupes au sein d&#39;un ensemble d&#39;échantillons, tout en déterminant en même temps la variation en leur sein. En some cas, les groupes ne peuvent pas être clairement distinguées l&#39;une de l&#39;autre et se chevauchent le long d&#39;un ou des deux axes. Dans ce cas, il est avantageux de tracer des autres composants (par exemple, PC3) afin de caractéristiques subtiles de groupes qui sont discriminés révéler. Ceci est particulièrement pertinent quand la variance totale est mieux répartie parmi les premiers de plusieurs variables. L&#39;analyse de fonction discriminante (DFA) de Procuste données ajustement détermine si les échantillons dans un ensemble de données sont effectivement victimes de discrimination en groupes par les variables continues qui les définissent. Les échantillons sont donc classés en groupes avant l&#39;analyse, et les variables sont converties en composants appelés fonctions discriminatoires pour déterminer la relation statistique entre les groupes 27. Avant d&#39;exécuter cette analyse, il est important d&#39;indiquer le nombre de tests de permutation. Ces tests de permutation randomisent les données telles que les hypothèses sur sa répartition sont eliminaTed. Plus itérations de test de permutation augmenter la précision de la valeur de p. Quand visualisé comme une grille de transformation, des changements significatifs dans la position de point de repère entre les groupes comparés sont affichés. En outre, le motif d&#39;ourdissage de la grille révèle où se produisent des changements de forme. L&#39;inconvénient de cette analyse est qu&#39;elle ne peut être utilisée pour la comparaison de deux groupes. Si il ya trois ou plusieurs groupes dans un ensemble d&#39;échantillons de comparaison, il est préférable d&#39;effectuer une analyse de variable aléatoire canonique. Ceci est similaire à un DFA en ce qu &#39;il génère une p-valeur statistique; Cependant, il montre les changements qui se produisent au cours de la totalité de l&#39;échantillon mis en plus de ceux qui se produisent entre différents groupes au sein de cet ensemble. La principale limite de ce protocole de quantification oro-faciale est qu&#39;il ne peut être appliqué à des données en deux dimensions. Nos objectifs pour l&#39;avenir comprennent l&#39;utilisation de la tomodensitométrie ou la microscopie confocale à développer des méthodes similaires pour l&#39;analyse des données en trois dimensions. D&#39;autre part,travailler avec des images en deux dimensions est également l&#39;un des principaux points forts de ce protocole. Seuls les stéréoscopes de base équipés de caméras sont nécessaires pour capturer des images de la face embryonnaire. Le OpenWare utilisé pour l&#39;analyse de données augmente également l&#39;accessibilité de cette méthode, tout en réduisant le coût. En outre, une connaissance avancée de l&#39;imagerie sophistique, analyses statistiques, ou la programmation informatique est pas nécessaire pour extraire des résultats importants et significatifs à partir des données. En fait, cette technique est actuellement enseignée dans le cadre d&#39;un cours de laboratoire de premier cycle dans le département engagement de la biologie. Ainsi, le protocole de quantification orofaciale présenté ici est facile à apprendre et à appliquer dans un court laps de temps. En tant que représentation de la vidéo, des étapes cruciales telles que le positionnement des embryons et la navigation du logiciel sont mis en évidence pour assurer le protocole peut être utilisé avec succès par les étudiants et les chercheurs, même sans formation. En résumé, ce protocole constituera une ressource précieusepour la communauté de recherche et comme un outil d&#39;enseignement.

Parmi les types les plus répandus et les plus dévastatrices de malformations congénitales humaines sont celles qui touchent la bouche et du visage, comme les fentes faciales 1. Les enfants atteints de malformations oro-faciales structures subissent des chirurgies multiples tout au long de leur durée de vie et luttent avec défigurations faciales, de la parole, de l&#39;ouïe et des problèmes d&#39;alimentation. Par conséquent, faciliter de nouvelles recherches dans le développement cranio et oro-facial est primordiale pour la prévention et le traitement de ces types d&#39;anomalies congénitales chez les humains. Xenopus laevis a émergé comme un nouvel outil pour disséquer les mécanismes qui régissent le développement cranio-facial (quelques exemples 2,3,4 -11). Par conséquent, une méthode quantitative pour analyser taille et la forme des changements au cours du développement de la tête et le visage de cette espèce pourrait être très puissant 3. Ici, nous présentons une telle méthode; combinant les mesures de taille traditionnels avec la morphométrie géométrique adaptées d&#39;une étude Xenopus 12 </sup&gt; et un grand nombre d&#39;études analysant la forme du visage humain 13-15. Le but de ce protocole est de permettre aux chercheurs de quantifier la taille du visage et des formes de distinction entre les différents phénotypes oro-faciales au cours du développement normal et anormal. Cette analyse permettra de mieux différencier les défauts cranio-faciales subtiles telles que celles découlant des effets synergiques de gènes et / ou des facteurs environnementaux. En outre, cette méthode de quantification pourrait également révéler même légère amélioration ou de sauvetage d&#39;un défaut oro-facial. Ceci permet donc un guide utile dans l&#39;analyse des agents thérapeutiques potentiels. La combinaison de mesures faciales et morphométrie géométrique que nous présentons ici permet une analyse statistique plus complet de la taille et la forme de la région oro-faciale que les protocoles actuels qui utilisent en grande partie l&#39;un ou l&#39;autre 15-18. En outre, nous présentons une méthode simple pour évaluer à la fois la médiane et plans latéraux dele visage sans nécessiter d&#39;équipement d&#39;imagerie en trois dimensions sophistiqués utilisés dans les études actuelles 13,19. Nous démontrons ce protocole sur Xenopus laevis embryons traités avec un inhibiteur du récepteur de l&#39;acide rétinoïque qui induit le développement bucco-faciale anormale et une fente palatine 2,3 médian. La quantification des dimensions et de la forme de la région orofaciale dans ces embryons ont révélé des changements dans le milieu du visage qui est analogue à l&#39;homme avec des fentes palatines similaires et des modèles de souris 20,21. Cependant, ce protocole peut être utilisé pour évaluer les effets d&#39;autres composés sur le développement orofaciale, tels que des substances naturelles, des herbicides ou des protéines telles que des facteurs de croissance. En outre, la taille et de la forme change oro-faciales résultant de la perturbation de l&#39;expression des gènes par la perte ou le gain d&#39;expériences de fonction (en utilisant morpholinos antisens ou bacs à légumes / Talens) peuvent également être quantifiés en utilisant ce protocole. Enfin, nous avons développé cette méthode specifically à évaluer Xenopus morphologie; cependant, il est facilement modifiée pour l&#39;analyse de tout vertébré. D&#39;autres applications pourraient aussi inclure l&#39;utilisation de ce protocole pour comparer espèces étroitement apparentées pour les études évolutives ou écologiques. Bien que l&#39;exemple que nous fournissons ici utilise ce protocole pour décrire l&#39;analyse de la région oro-faciale, il pourrait facilement être modifié pour l&#39;analyse d&#39;autres régions, des organes ou structures. Ce protocole de quantification orofaciale deviendra une ressource précieuse pour la communauté de la recherche, ainsi que d&#39;un excellent outil d&#39;enseignement pour les étudiants de premier cycle comme une vidéo de démonstration.

<table><tbody><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td>fitted with AxioCamICC1 camera</td></tr><tr><td>Dumont #5 Inox forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Sterile, disposable scalpel</td><td>Sklar</td><td>06-2015</td><td></td></tr><tr><td>24-well plate</td><td>Fisher Scientific</td><td>087721</td><td></td></tr><tr><td>Standard Disposable transfer pipettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-7M</td><td></td></tr><tr><td>150 mm x 15 mm Petri dishes</td><td>Falcon</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>Incubators</td><td>Ectotherm</td><td></td><td>set to 15 &amp;deg;C or 20 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>Modeling Clay</td><td>Premo, or other non-toxic modeling clay</td><td></td><td>in black or white</td></tr><tr><td>Straight teasing needle</td><td>Thermo Scientific</td><td>19010</td><td></td></tr><tr><td>Capillary Tubing (for needles)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td>Borosil 1.0 mm OD x 0.5 mm ID/Fiber, 100 mm each</td></tr><tr><td>Needle Puller, Model P-97</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>Needle Puller: P-97 Flaming/ Bown micropipette puller Filament: FB300B</td><td>For filaments, use Sutter 3.00 mm square box filaments, 3.0 mm wide.</td></tr><tr><td>Pipettemen</td><td>Gilson</td><td>F144802, F123600, F123602</td><td></td></tr><tr><td>BMS-453</td><td>Tocris</td><td>3409</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>American Bioanalytical</td><td>AB00435-01000</td><td></td></tr><tr><td>Cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>52-90-4</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde powder</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Falcom</td><td>353003, 351058</td><td>100 mm diameter and 150 mm in diameter</td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>VWR</td><td>89125-170</td><td></td></tr></tbody></table>

quantification of orofacial phenotypes in xenopus

Xenopus est devenu un outil important pour disséquer les mécanismes qui régissent le développement cranio-faciale et des anomalies. Une méthode pour quantifier le développement bucco-faciale permettra une analyse plus rigoureuse des phénotypes orofaciaux sur l&#39;abrogation des substances qui peuvent génétiquement ou moléculaire manipuler l&#39;expression des gènes ou la fonction des protéines. L&#39;utilisation de deux images tridimensionnelles des chefs embryonnaires, dimensions telles de taille traditionnels que la largeur bucco-faciale, la hauteur et Area-sont mesurés. En outre, une mesure de la rondeur de l&#39;ouverture de bouche embryonnaire est utilisé pour décrire la forme de la bouche. Morphométrie géométrique de ces images en deux dimensions est également effectuée pour fournir une vue plus sophistiqué de l&#39;évolution de la forme de la région oro-facial. Sites d&#39;intérêt sont affectés à des points spécifiques de la région oro-faciale et coordonnées sont créés. Une analyse en composantes principales est utilisé pour réduire les coordonnées de point de repère aux principaux composants qui constituent une discrimination alors le traitementgroupes. Ces résultats sont affichés sous forme de nuage de points dans lequel les individus avec des formes oro-faciales similaires se regroupent. Il est également utile pour effectuer une analyse discriminante, qui compare statistiquement les positions des points de repère entre les deux groupes de traitement. Cette analyse est affichée sur une grille de transformation où les changements de position de point de repère sont considérés comme des vecteurs. Une grille se superpose à ces vecteurs de sorte qu&#39;un motif de déformation est affichée pour montrer où les positions historiques importantes ont changé. les changements de forme dans l&#39;analyse de la fonction discriminante sont basées sur une mesure statistique, et peuvent donc être évalués par un p-valeur. Cette analyse est simple et accessible, nécessitant seulement un stéréoscope et logiciel freeware, et donc sera une recherche et d&#39;enseignement ressource précieuse.

Ici, une analyse quantitative de la taille et de la forme orofaciale a été démontrée pour comparer les embryons traités avec un inhibiteur du récepteur de l&#39;acide rétinoïque (un inhibiteur de RAR) à des témoins non traités. Les embryons ont été traitées avec une concentration de 1 uM de cet inhibiteur chimique de l&#39;étape 24 à 30 (26 à 35 hpf), lavées, fixées et, à l&#39;étape 42 (82 hpf). Ils ont ensuite été traités et analysés comme décrit dans le protocole. Les résultats sont données originales, mais cohérent avec les observations dans des publications antérieures 2,3. embryons témoins ont été traitées avec le véhicule, le DMSO, et se développent normalement (figure 7Ai, ii). Embryons traités avec une concentration de 1 uM de l&#39;inhibiteur de RAR ont montré léger rétrécissement de la face, anomalies oculaires, et une bouche embryonnaire malformé ouverture qui a été façonnée plus triangulaire (Figure 7Aiii, iv). Tout d&#39;abord, les dimensions orofaciaux traditionnels ont été mesurées et sont résumées dans la figure 7B. S<html> STATISTIQUES importance a été déterminée en effectuant le test t de Student en supposant une variance inégale entre inhibiteurs embryons et des contrôles traités pour chaque mesure. Nous avons constaté que les deux la longueur du museau et la largeur de son visage étaient significativement diminuées chez les inhibiteurs traité RAR embryons par rapport aux témoins (p = 0,0062 valeurs et 0,0058, respectivement; Figure 7Bi, ii). Bien que la hauteur du visage et de la bouche rondeur ont été sensiblement augmentés (p = 3,7772 valeurs x 10 -6, 1,4812 x 10 -7), la largeur de la bouche était significativement diminué (p = 2,5175 x 10 -10; Figure 7Biii-v) .La résultats ont montré aucune différence significative dans la zone orofaciale globale entre les deux groupes (p = 0,3754; Figure 7Bvi). Ces données montrent que la perte de la signalisation de l&#39;acide rétinoïque à un moment précis dans les résultats de développement dans un museau plus court, léger rétrécissement de la région médio-faciale, et une malformation de l&#39;ouverture de la bouche embryonnaire. nt &quot;&gt; pour fournir une vue sophistiquée des changements de forme de la région oro-facial embryonnaire en réponse aux signaux de l&#39;acide rétinoïque réduits, nous avons ensuite utilisé morphométrique géométrique analyses. Après avoir identifié et l&#39;alignement monuments orofaciaux l&#39;aide du logiciel d&#39;analyse morphométrique, nous a ensuite examiné la variance au sein de chaque groupe par analyse en composantes principales (ACP). Lorsque les deux premières composantes principales ont été tracées les uns contre les autres, les embryons inhibiteur de RAR traités ont été clairement distingués des contrôles le long de l&#39;axe PC1 (Figure 7C). Ce test a également montré les valeurs aberrantes dans l&#39;échantillon de consigne illustré par deux inhibiteurs embryons traités qui ne regroupent pas avec le reste du groupe (figure 7C, flèches). Ensuite, les différences statistiques dans la forme de la région oro-faciale entre inhibiteurs traité RAR embryons et des contrôles ont été évaluées et visualisées en effectuant une analyse de fonction discriminante (DFA). La distance Procuste bntre les deux groupes était significativement différent (distance = 0,2665, p &lt;0,0001, figure 7D), indiquant un changement dans la forme oro-facial lors de signalisation de l&#39;acide rétinoïque est perturbé. En effet, des changements dramatiques dans la position des repères latéraux de la région orofaciale indiquent un rétrécissement de la forme du visage respectif à la hauteur en inhibiteur embryons traités (Figure 7D). En outre, le léger décalage vers l&#39;extérieur en position de les repères nasales (Figure 7D, flèches) révèle l&#39;anomalie en position de narine dans ces embryons qui soit compatible avec une diminution excroissance du museau. Les changements de repères qui définissent les bords de la bouche ouverture changements spectacle de position qui reflètent la formation d&#39;une bouche en forme de triangulaire ouverture qui est compatible avec la fente médiane signalé dans nos études précédentes 2,3. En plus des changements de vecteur, le motif d&#39;ourdissage de la grille de transformation illustre également des changements de forme ou de laofacial région. Déformation dans la région de midface est compatible avec la hypoplasie médio-faciale et le rétrécissement global du visage vu dans les embryons avec des signaux de l&#39;acide rétinoïque diminué (Figure 7D). Les résultats de l&#39;analyse de fonction discriminante (DFA) montrent des modifications de forme qui ont été en accord avec notre analyse qualitative, tout en révélant des changements qui ne sont pas pris en considération par les mesures de taille traditionnels seuls. Par exemple, alors que la région orofaciale ne différait pas significativement entre les commandes et l&#39;inhibiteur embryons traités (Figure 7Bvi), la grille de transformation TFD a révélé des changements spectaculaires dans cette région en conformité avec le rétrécissement du visage en vue inhibiteurs embryons traités (Figure 7A, D). En outre, les motifs déformation et historiques des changements de l&#39;ouverture de la bouche, couplés avec les changements importants que nous avons vu dans la bouche rondeur, illustrent la malformation de l&#39;ouverture de la bouche forme en inhibiteur traité embryos. En résumé, une combinaison de mesures traditionnelles de dimensions du visage et analyse morphométrique géométrique illustre les changements dans la forme et la taille de la région oro-faciale lorsque les signaux de l&#39;acide rétinoïque sont perturbés. <img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52062/52062fig1highres.jpg" width="500" /> Figure 1. Les matières obligatoires. (a) des outils d&#39;analyse des données. (I) de la plaque de 24 puits, (ii) pipette de transfert jetable standard, (iii) Dumont # 5 forceps Inox, (iv) l&#39;argile bordée boîte de Pétri, (v) l&#39;aiguille de taquineries droite, (vi) outil pipette en verre, (vii ) stérile, scalpel jetable. (B) Préparation du plat revêtu d&#39;argile. (I) Une aiguille taquine droite est utilisé pour dessiner des lignes horizontales dans l&#39;argile. (Ii) Un outil pipette de verre est utilisé pour faire des dépressions circulaires le long de chaque rangée. (Iii) La coupelle est remplie avec du PBT pour l&#39;imagerie. page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Figure 2" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52062/52062fig2highres.jpg" width="300" /> Figure 2. La fécondation in vitro et la culture des œufs de xénope. (A) Après injection de HCG, adultes Xenopus laevis femelles sont amenés à pondre des œufs. (B) Les œufs sont collectés dans des MBS en sel élevées, fécondées avec testicules extraites d&#39;un mâle, et mises en culture en utilisant des procédés standard. (C) d&#39;embryons sont transférés dans un plat de 24 puits contenant 0,1X MBS en utilisant un standard, disponible pipette de transfert. (D) Une pipette homme calibré est utilisé pour mesurer 1 ml dans un puits vide, et un marqueur est utilisé pour délimiter ce niveau à l&#39;extérieur de tous les puits contenant des embryons (en médaillon). 0,1x MBS est ensuite ajouté ou enlevé de sorte qu&#39;il est de niveau avec cette marque. highres.jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; Figure 3. Préparation des chefs d&#39;embryons pour l&#39;imagerie. (A) Schéma des deux incisions nécessaires pour enlever les têtes de lignes noires solides. Barre d&#39;échelle = 400 um. (B) La première incision est faite à l&#39;extrémité postérieure de l&#39;intestin pour enlever la queue et relâcher la pression du scalpel. Barre d&#39;échelle = 400 um. (C) La seconde incision est faite à l&#39;extrémité antérieure de l&#39;intestin, près du coeur, de rompre complètement la tête. Barre d&#39;échelle = 400 um. (D) une vue frontale de la rangée de têtes d&#39;embryons placés dans l&#39;argile. Barre d&#39;échelle = 650 um. (E) des vues latérales de la ligne de la position de la tête de l&#39;embryon dans l&#39;argile. Barre d&#39;échelle = 500 um cg: glande ciment. <img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52062/52062fig4highres.jpg" width="500" /> Figure 4. Les mesures classiques de taille des dimensions bucco-faciales. (A) </strong&gt; largeur du visage. Les flèches indiquent les points où la partie ventrale de l&#39;œil rencontre la périphérie de la face. La ligne rouge est la largeur de la face, mesurée comme la distance entre ces points. lignes Barre d&#39;échelle = 210 uM. (B) Hauteur visage. blancs sont des guides élaborés avant la mesure à la partie dorsale des yeux et de la partie dorsale de la glande ciment. La ligne rouge est la hauteur de la face, mesurée comme la distance entre ces deux guides sur la ligne médiane du visage. Barre d&#39;échelle = 210 uM. (C) zone oro-faciale. des lignes blanches sont des guides élaborés avant la mesure. (A) Le point où le guide inférieur rencontre le bord ventral de l&#39;œil gauche. La ligne rouge montre le tracé autour de l&#39;œil gauche. (B) Le point où la partie dorsale de l&#39;œil rencontre le guide supérieur. La ligne bleue montre la limite dorsale de la zone oro-faciale, tracée le long du guide haut à la partie dorsale des yeux. (C) Le point où le guide supérieur répond à la périphérie faciale droite. Spectacles de la ligne vertele tracé autour de l&#39;œil droit. (D) Le point où le bord ventral de l&#39;œil droit répond le guide bas. Ligne jaune représente la limite ventrale de la zone oro-faciale, tracée le long du guide en bas au bord dorsal de la glande ciment. Barre d&#39;échelle = 210 uM. (D) la longueur du museau. La ligne blanche est le bord antérieur de l&#39;œil et est dessiné comme un guide avant la mesure. La ligne rouge est la longueur du museau, mesurée à partir de cette ligne au point où la partie dorsale de la glande ciment conforme à la périphérie latérale de la face. Barre d&#39;échelle = 300 um. largeur (E) Bouche. Arrows sont les points où la dorsale et ventrale lèvres se rencontrent. La ligne rouge représente la largeur de l&#39;embouchure, mesurée comme la distance entre ces deux points. Barre d&#39;échelle = 200 um. (F) Bouche rondeur. Le périmètre de l&#39;ouverture de la bouche est tracée et affichée en rouge. CG: glande ciment. Barre d&#39;échelle = 200 um. <img aLT = &quot;Figure 5&quot; fo: contenu width = &quot;5 pouces&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52062 / 52062fig5highres.jpg&quot; width = &quot;500&quot; /&gt; Figure 5. Capture repères et préliminaires pour l&#39;analyse morphométrique géométrique. (A) en utilisant un logiciel de retouche photo et un tableur pour placer des repères et coordonnées de capture. (I) des croix multicolores sont les monuments placés sur l&#39;image en utilisant l&#39;outil de points de Ajouter au ImageJ pour représenter la forme de la région oro-facial. (Ii) les données de repère est affiché à l&#39;aide de l&#39;écran Résultats Tool. (Iii) les données de repère est copié et collé dans une feuille de calcul. Au-dessus de la deuxième colonne est un en-tête identifiant le nombre de points de repère et désigné par &quot;LM = 24&quot; (boîte rouge). Ci-dessous, la deuxième colonne de données, l&#39;échantillon est donnée un nom unique et désigné par &quot;ID = CON1&quot; (flèche rouge). Cette opération est répétée pour toutes les images dans un ensemble de l&#39;échantillon et les données sont enregistrées dans un fichier texte. (B) analyse préliminaire des données dans un morphométrique géométrique softwsont programme. (I) Le fichier texte créé dans le logiciel de retouche photo est importé dans le programme morphométrique, MorphoJ, comme un fichier TPS. Le fichier est indiqué par la flèche rouge. (Ii) repère de coordonnées données sont alignées par Procuste ajustement par les axes principaux. La flèche rouge indique l&#39;exécution de l&#39;alignement. (Iii) une matrice de covariance de Procuste repères d&#39;ajustement est généré dans le menu Préliminaires. (Iv) Un fichier de classificateur est créé dans une feuille de calcul. La colonne A et B sont donnés en-têtes «ID» et «traitement», respectivement. Donné à chaque échantillon dans la collecte de données de point de repère sont l&#39;entrée de l&#39;ID dans la colonne A, ainsi que le groupe de traitement qui chaque échantillon appartient est entrée dans la colonne B. (v) Le fichier de classificateur est importé dans le programme morphométrique comme un classificateur ensemble de variables et appariés par identificateur pour l&#39;ensemble de données choisi. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52062/52062fig5highres.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de</a>ce chiffre. <img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52062/52062fig6highres.jpg" width="500" /> Figure 6. Analyse statistique des logiciels morphométrique. (A) Analyse en Composantes Principales (ACP) (i) PCA est sélectionné dans l&#39;onglet Variation. (Ii) Les deux premières composantes principales de repères Procrustes sont affichés comme un nuage de points dans l&#39;onglet PC scores. (Iii) Un menu pop-up est élevé dans l&#39;espace de la parcelle. Ce menu permet de modifier les composants principaux sont tracés les uns contre les autres (flèche rouge) et pour colorer les points de données (surligné en bleu). (Iv) Les points de données sont colorées en fonction des variables de classificateur dans le menu pop-up. (V) Pourcentage de variance capturée par chaque composante principale est affichée dans l&#39;onglet Résultats. (B) Fonction analyse discriminante (DFA) (i) DFA est sélectionné dans l&#39;onglet de comparaison. (ii) L&#39;ensemble des données de Procuste coordonnées est sélectionné pour DFA, et les classificateurs téléchargés précédemment sont choisis pour le regroupement. Les groupes désirés à comparer sont choisis et des tests de permutation sont exécutés. (Iii) les résultats DFA sont affichées comme une carte de vecteur dans l&#39;onglet Forme de la différence. Un menu pop-up dans l&#39;espace de la parcelle peut être utilisé pour orienter correctement l&#39;image. (Iv) En sélectionnant l&#39;onglet Set Facteur d&#39;échelle dans le menu pop-up, le signe du facteur d&#39;échelle peut être modifiée. (V) La carte de vecteur est remplacée par une grille de transformation avec le nombre souhaité de lignes de la grille en choisissant Modifier le type de graphique dans le menu pop-up de la carte vectorielle. (Vi) Le Mahalanobis et Procrustes distances et les p-valeurs correspondantes sont considérées sous l&#39;onglet Résultats. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52062/52062fig6highres.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <imgalt = &quot;Figure 7&quot; fo: contenu width = &quot;5 pouces&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52062 / 52062fig7highres.jpg&quot; width = &quot;500&quot; /&gt; Figure 7. Analyse Orofacial de contrôle et RAR inhibé embryons traités. (A) (i, ii) des images représentatives de contrôles. Barres d&#39;échelle = 270 um. (III, IV) Les embryons traités avec une concentration de 1 uM de l&#39;inhibiteur de RAR, BMS-453. Barres d&#39;échelle = 260 um. (I, iii) frontale vues. Ouverture buccale est décrite dans les points rouges. (II, IV) Vues de côté. CG:. glande ciment (B) dimensions traditionnelles de contrôle oro-faciales (noir) et de l&#39;inhibiteur traité (bleu) embryons. (I) de la longueur du museau, en mm (ii) la largeur du visage, en mm (iii) la hauteur de visage, en mm (iv) la largeur de la bouche, en mm (v) la bouche rondeur, un nombre sans unité déterminée dans ImageJ aide de l&#39;équation: (4 &#8197; × &#8197; [Espace]) / (π &#8197; × &#8197; [Axe majeur] 2). (Vi) de la zone oro-faciale, en mm <sup&gt; 2. Les astérisques indiquent une signification telle que déterminée par le test t de Student en supposant une variance inégale. α &lt;0,05. (C) Analyse en Composantes Principales. Des contrôles sont en inhibiteur traité embryons noir et RAR sont en bleu. Les flèches noires indiquent les valeurs aberrantes. PC1 = 73,63%, PC2 = 9,56%. (D) analyse discriminante de fonction d&#39;affichage de la distance Procrustes et p-value, en plus d&#39;une grille de transformation. Final du cercle fermé de vecteur est la position historique en inhibiteur de RAR embryons traités. L&#39;extrémité de la ligne du vecteur est la position de point de repère dans les contrôles. Les flèches noires indiquent changement de repères nasales. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52062/52062fig7highres.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>

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Quantification of Orofacial Phenotypes in Xenopus

Procédé pour quantifier la taille et la forme de orofaciale embryons de Xenopus laevis a été développé. Dans ce protocole, les mesures traditionnelles de taille sont combinés avec la morphométrie géométrique pour permettre des analyses plus poussées de développement oro-faciale et des anomalies.

Quantification de Orofacial phénotypes dans<em&gt; Xenopus</em

Xenopus has become an important tool for dissecting the mechanisms governing craniofacial development and defects. A method to quantify orofacial ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

Quantification of Orofacial Phenotypes in Xenopus

9.7K vues.  Virginia Commonwealth University.  Procédé pour quantifier la taille et la forme de orofaciale embryons de Xenopus laevis a été développé. Dans ce protocole, les mesures traditionnelles de taille sont combinés avec la morphométrie géométrique pour permettre des analyses plus poussées de développement oro-faciale et des anomalies. 

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Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development. The Xenopuslaevis embryo is very useful for studying organogenesis because their large size makes them very suitable for identifying organs at the earliest steps in organogenesis. At this time, the primary method used for identifying a specific organ or primordium is whole mount in situ hybridization with labeled antisense RNA probes specific to a gene that is expressed in the organ of interest. In addition, it is relatively easy to manipulate genes or signaling pathways in Xenopus and in situ hybridization allows one to then assay for changes in the presence or morphology of a target organ. Whole mount in situ hybridization is a multi-day protocol with many steps involved. Here we provide a simplified protocol with reduced numbers of steps and reagents used that works well for routine assays. In situ hybridization robots have greatly facilitated the process and we detail how and when we utilize that technology in the process. Once an in situ hybridization is complete, capturing the best image of the result can be frustrating. We provide advice on how to optimize imaging of in situ hybridization results. Although the protocol describes assessing organogenesis in Xenopus laevis, the same basic protocol can almost certainly be adapted to Xenopus tropicalis and other model systems.

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

The Xenopus laevis embryo continues to be exceptionally useful in the study of early development due to its large size and ease of manipulation. A simplified protocol for whole mount in situ hybridization protocol is provided that can be used in the identification of specific organs in this model system.

Comprendre organogenèse précoce aide d&#39;un simplifié<em&gt; In Situ</em&gt; Protocole hybridation in<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Recherche

Biologie du développement

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The efficient in vivo visualization of blood vessels and the reliable quantification of their complexity are key to understanding the biology and disease of the vascular network. Here, we provide a detailed method to visualize blood vessels with a commercially available fluorescent dye, human plasma acetylated low density lipoprotein DiI complex (DiI-AcLDL), and to quantify their complexity in Xenopus tropicalis. Blood vessels can be labeled by a simple injection of DiI-AcLDL into the beating heart of an embryo, and blood vessels in the entire embryo can be imaged in live or fixed embryos. Combined with gene perturbation by the targeted microinjection of nucleic acids and/or the bath application of pharmacological reagents, the roles of a gene or of a signaling pathway on vascular development can be investigated within one week without resorting to sophisticated genetically engineered animals. Because of the well-defined venous system of Xenopus and its stereotypic angiogenesis, the sprouting of pre-existing vessels, vessel complexity can be quantified efficiently after perturbation experiments. This relatively simple protocol should serve as an easily accessible tool in diverse fields of cardiovascular research.

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

This protocol demonstrates a fluorescence-based method to visualize the vasculature and to quantify its complexity in Xenopus tropicalis. Blood vessels can be imaged minutes after the injection of a fluorescent dye into the beating heart of an embryo after genetic and/or pharmacological manipulations to study cardiovascular development in vivo.

Visualisation et analyse quantitative de l&#39;angiogenèse embryonnaire dans<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

The primary visual projection of tadpoles of the aquatic frog Xenopus laevis serves as an excellent model system for studying mechanisms that regulate the development of neuronal connectivity. During establishment of the retino-tectal projection, optic axons extend from the eye and navigate through distinct regions of the brain to reach their target tissue, the optic tectum. Once optic axons enter the tectum, they elaborate terminal arbors that function to increase the number of synaptic connections they can make with target interneurons in the tectum. Here, we describe a method to express DNA encoding green fluorescent protein (GFP), and gain- and loss-of-function gene constructs, in optic neurons (retinal ganglion cells) in Xenopus embryos. We explain how to microinject a combined DNA/lipofection reagent into eyebuds of one day old embryos such that exogenous genes are expressed in single or small numbers of optic neurons. By tagging genes with GFP or co-injecting with a GFP plasmid, terminal axonal arbors of individual optic neurons with altered molecular signaling can be imaged directly in brains of intact, living Xenopus tadpoles several days later, and their morphology can be quantified. This protocol allows for determination of cell-autonomous molecular mechanisms that underlie the development of optic axon arborization in vivo.

Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

This protocol aims to demonstrate how to microinject a DNA/DOTAP mixture into eyebuds of one day old Xenopus laevis embryos, and how to image and reconstruct individual green fluorescent protein (GFP) expressing optic axonal arbors in tectal midbrains of intact, living Xenopus tadpoles.

Microinjection d'ADN dans eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

The primary visual projection of tadpoles of the aquatic frog Xenopus laevis serves as an excellent model system for studying mechanisms that regulate the ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes in cell surface area and cell height, and where cells undergo mitosis and migrate. Furthermore, epithelial cells can also regulate morphogenetic movements in adjacent tissues1. A traditional method to study epithelial cells and tissues involve chemical fixation and histological methods to determine cell morphology or localization of particular proteins of interest. These approaches continue to be useful and provide "snapshots" of cell shapes and tissue architecture, however, much remains to be understood about how cells acquire specific shapes, how various proteins move or localize to specific positions, and what paths cells follow toward their final differentiated fate. High resolution live imaging complements traditional methods and also allows more direct investigation into the dynamic cellular processes involved in the formation, maintenance, and morphogenesis of multicellular epithelial sheets. Here we demonstrate experimental methods from the isolation of animal cap tissues from Xenopus laevis embryos to confocal imaging of epithelial cells and simple measurement approaches that together can augment molecular and cellular studies of epithelial morphogenesis.

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonic epithelia are an ideal model system to study cell behaviors such as polarity development and shape change during epithelial morphogenesis. Traditional histology of fixed samples is increasingly being complemented by live-cell confocal imaging. Here we demonstrate methods to isolate frog tissues and visualize live epithelial cells and their cytoskeleton using live-cell confocal microscopy.

Imagerie des cellules vivantes et de l&#39;analyse quantitative des cellules embryonnaires épithéliales Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Biologie

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

Primary neurogenesis is a dynamic and complex process during embryonic development that sets up the initial layout of the central nervous system. During this process, a portion of neural stem cells undergo differentiation and give rise to the first populations of differentiated primary neurons within the nascent central nervous system. Several vertebrate model organisms have been used to explore the mechanisms of neural cell fate specification, patterning, and differentiation. Among these is the African clawed frog, Xenopus, which provides a powerful system for investigating the molecular and cellular mechanisms responsible for primary neurogenesis due to its rapid and accessible development and ease of embryological and molecular manipulations. Here, we present a convenient and rapid method to observe the different populations of neuronal cells within Xenopus central nervous system. Using antibody staining and immunofluorescence on sections of Xenopus embryos, we are able to observe the locations of neural stem cells and differentiated primary neurons during primary neurogenesis.

Assessing Primary Neurogenesis in Xenopus Embryos Using Immunostaining

This article presents a convenient and rapid method for visualizing different neuronal cell populations in the central nervous system of Xenopus embryos using immunofluorescent staining on sections.

Évaluation de la neurogenèse primaire en<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryons Utilisation de immunocoloration

Primary neurogenesis is a dynamic and complex process during embryonic development that sets up the initial layout of the central nervous system. During ...

Neurosciences

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. For example, electroporation has been used with great success to study neural and retinal development in Xenopus, chicken and mouse 1-10. However, it is important to note that in all of these studies, investigators were not targeting soft tissues. Because we are interested in craniofacial development, we adapted a method to target facial mesenchyme.
When we searched the literature, we found, to our surprise, very few reports of successful gene transfer into cartilaginous tissue. The majority of these studies were gene therapy studies, such as siRNA or protein delivery into chondrogenic cell lines, or, animal models of arthritis 11-13. In other systems, such as chicken or mouse, electroporation of facial mesenchyme has been challenging (personal communications, Dept of Craniofacial Development, KCL). We hypothesized that electroporation into procartilaginous and cartilaginous tissues in Xenopus might work better. In our studies, we show that gene transfer into the facial cartilages occurs efficiently at early stages (28), when the facial primordium is still comprised of soft tissue prior to cartilage differentiation.
Xenopus is a very accessible vertebrate system for analysis of craniofacial development. Craniofacial structures are more readily visible in Xenopus than in any other vertebrate model, primarily because Xenopus embryos are fertilized externally, allowing analyses of the earliest stages, and facilitating live imaging at single cell resolution, as well as reuse of the mothers 14. Among vertebrate models developing externally, Xenopus is more useful for craniofacial analysis than zebrafish, as Xenopus larvae are larger and easier to dissect, and the developing facial region is more accessible to imaging than the equivalent region in fish. In addition, Xenopus is evolutionarily closer to humans than zebrafish (&tilde;100 million years closer) 15. Finally, at these stages, Xenopus tadpoles are transparent, and concurrent expression of fluorescent proteins or molecules will allow easy visualization of the developing cartilages. We anticipate that this approach will allow us to rapidly and efficiently test candidate molecules in an in vivo model system.

Craniofacial cartilages develop in close contact with other tissues and are difficult to manipulate in live animals. We are using electroporation to deliver molecular tools during growth of the craniofacial skeleton while bypassing early embryonic effects. This approach will allow us to efficiently test candidate molecules in vivo.

Electroporation de Mesenchyme craniofaciale

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. ...

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as accessibility to numerous imaging approaches, electrophysiological techniques and behavioral assays. The Xenopus tadpole olfactory system is particularly well suited to investigate the function of synapses established during normal development or reformed after injury. Here, we describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae. We outline a combination of in vivo measurements of presynaptic calcium responses in glomeruli of the olfactory bulb with olfactory-guided behavior assays. Methods can be combined with the transection of olfactory nerves to study the rewiring of synaptic connectivity. Experiments are presented using both wild-type and genetically modified animals expressing GFP reporters in central nervous system cells. Application of the approaches described to genetically modified tadpoles can be useful for unraveling the molecular bases that define vertebrate behavior.

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system in vivo. We describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae in normal rearing conditions or after injury.

Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, convergence and extension of facial prominences, and maturation of the craniofacial skeleton. To study the contribution of the cranial neural crest to specific regions of the zebrafish palate a sox10: kaede transgenic zebrafish line was generated. Sox10 provides lineage restriction of the kaede reporter protein to the neural crest, thereby making the cell labeling a more precise process than traditional dye or reporter mRNA injection. Kaede is a photo-convertible protein that turns from green to red after photo activation and makes it possible to follow cells precisely. The sox10: kaede transgenic line was used to perform lineage analysis to delineate CNC cell populations that give rise to maxillary versus mandibular elements and illustrate homology of facial prominences to amniotes. This protocol describes the steps to generate a live time-lapse video of a sox10: kaede zebrafish embryo. Development of the ethmoid plate will serve as a practical example. This protocol can be applied to making a time-lapse confocal recording of any kaede or similar photoconvertible reporter protein in transgenic zebrafish. Furthermore, it can be used to capture not only normal, but also abnormal development of craniofacial structures in the zebrafish mutants.

Visualization of experimental data has become a key element in presenting results to the scientific community. Generation of live time-lapse recording of growing embryos contributes to better presentation and understanding of complex developmental processes. This protocol is a step-by-step guide to cell labeling via photoconversion of kaede protein in zebrafish.

Visualisation de développement cranio-facial dans les SOX10: Kaede poisson zèbre transgénique ligne à l&#39;aide Time-lapse de microscopie confocale

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. To identify where signaling pathways and tissues act during patterning of the developing face, a 'face transplant' technique has been developed in embryos of the frog Xenopus laevis. A region of presumptive facial tissue (the "Extreme Anterior Domain" (EAD)) is removed from a donor embryo at tailbud stage, and transplanted to a host embryo of the same stage, from which the equivalent region has been removed. This can be used to generate a chimeric face where the host or donor tissue has a loss or gain of function in a gene, and/or includes a lineage label. After healing, the outcome of development is monitored, and indicates roles of the signaling pathway within the donor or surrounding host tissues. Xenopus is a valuable model for face development, as the facial region is large and readily accessible for micromanipulation. Many embryos can be assayed, over a short time period since development occurs rapidly. Findings in the frog are relevant to human development, since craniofacial processes appear conserved between Xenopus and mammals.

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

A technique for transplanting "Extreme Anterior Domain" facial tissue between Xenopus laevis embryos has been developed. Tissue can be moved from one gene expression background into another, allowing the study of local requirements for craniofacial development and for signaling interactions between facial regions.

Transplantations faciales<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryons

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Reverse Genetic Approach to Identify Regulators of Pigmentation using Zebrafish

Melanocytes are specialized neural crest-derived cells present in the epidermal skin. These cells synthesize melanin pigment that protects the genome from harmful ultraviolet radiations. Perturbations in melanocyte functioning lead to pigmentary disorders such as piebaldism, albinism, vitiligo, melasma, and melanoma. Zebrafish is an excellent model system to understand melanocyte functions. The presence of conspicuous pigmented melanocytes, ease of genetic manipulation, and availability of transgenic fluorescent lines facilitate the study of pigmentation. This study employs the use of wild-type and transgenic zebrafish lines that drive green fluorescent protein (GFP) expression under mitfa and tyrp1 promoters that mark various stages of melanocytes. 
Morpholino-based silencing of candidate genes is achieved to evaluate the phenotypic outcome on larval pigmentation and is applicable to screen for regulators of pigmentation. This protocol demonstrates the method from microinjection to imaging and fluorescence-activated cell sorting (FACS)-based dissection of phenotypes using two candidate genes, carbonic anhydrase 14 (Ca14) and a histone variant (H2afv), to comprehensively assess the pigmentation outcome. Further, this protocol demonstrates segregating candidate genes into melanocyte specifiers and differentiators that selectively alter melanocyte numbers and melanin content per cell, respectively.

Regulators of melanocyte functions govern visible differences in the pigmentation outcome. Deciphering the molecular function of the candidate pigmentation gene poses a challenge. Herein, we demonstrate the use of a zebrafish model system to identify candidates and classify them into regulators of melanin content and melanocyte number.

Approche génétique inverse pour identifier les régulateurs de pigmentation à l’aide du poisson zèbre

Melanocytes are specialized neural crest-derived cells present in the epidermal skin. These cells synthesize melanin pigment that protects the genome from ...

Quantification de Orofacial phénotypes dans

Résumé

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Chapitres dans cette vidéo

Comprendre organogenèse précoce aide d'un simplifié

Visualisation et analyse quantitative de l'angiogenèse embryonnaire dans

Microinjection d'ADN dans eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

Imagerie des cellules vivantes et de l'analyse quantitative des cellules embryonnaires épithéliales Xenopus laevis

Évaluation de la neurogenèse primaire en

Electroporation de Mesenchyme craniofaciale

Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant

Visualisation de développement cranio-facial dans les SOX10: Kaede poisson zèbre transgénique ligne à l'aide Time-lapse de microscopie confocale

Transplantations faciales

Approche génétique inverse pour identifier les régulateurs de pigmentation à l’aide du poisson zèbre