Obtención de imágenes de calcio en vivo de monocapas de organoides intestinales humanos infectadas por virus utilizando indicadores de calcio codificados genéticamente

A través de nuestro trabajo, nuestro objetivo es comprender cómo los virus interrumpen la señalización dentro del epitelio intestinal. Estamos particularmente interesados en comprender las formas en que las células infectadas por virus desregulan las células vecinas no infectadas para contribuir a la patogénesis. Recientemente hemos descubierto que las células infectadas por rotavirus liberan pulsos de ADP, que desregula las células vecinas no infectadas y facilita la propagación viral y exacerba la enfermedad.

Si bien las imágenes de calcio son muy populares en campos como la neurociencia, no se han utilizado ampliamente para estudiar la biología epitelial o la virología. Este protocolo ofrece un enfoque para adaptar las tecnologías existentes y los sistemas modelo para estudiar la señalización del calcio y el tejido epitelial infectado por virus vivos. Mediante la ingeniería de organoides para expresar indicadores de calcio codificados genéticamente, nuestro enfoque permite obtener imágenes consistentes y reproducibles a largo plazo en un sistema modelo que recapitula la diversidad celular del epitelio intestinal humano.

Nuestro objetivo es comprender los efectos de la señalización purinérgica paracrina inducida por virus tanto para el huésped como para el virus. Nuestro trabajo futuro también determinará si este tipo de señalización se conserva ampliamente en otros virus y si los efectos son similares.