Tres experimentos clínicos sugirieron que el trasplante de microbiota fecal tiene el potencial terapéutico para una serie de enfermedades humanas. Otros estudios mecanicistas ayudarán a llevar el FMT del banco a la cabecera. Este método adopta el sonda oral para la ruta de entrega, lo que permite una entrega de volumen más precisa y una absorción rápida.
Solo requiere habilidades técnicas moderadas. Demostrando el procedimiento estará Xioying Zhong, un investigador asociado senior de nuestro laboratorio. Comience preparando toallas de papel estériles, pinzas de extremo romo y tubos cónicos de 50 mililitros.
Coloque algunas toallas de papel y pinzas en bolsas de autoclave separadas y autoclave a 180 grados centígrados en calor seco durante 30 minutos. Pese los tubos cónicos estériles y anote su peso en los tubos. Encienda el gabinete de bioseguridad en la habitación del animal.
Tome una jaula de ratón limpia esterilizada en autoclave sin ropa de cama y colóquela en el gabinete de bioseguridad. Retire la tapa y el estante de comida y colóquelos dentro del gabinete. Coloque algunas toallas de papel estériles en la parte inferior de la jaula y vuelva a colocar la rejilla de metal en la parte superior de la jaula.
Identifique a los donantes fecales de la misma edad y coloque la jaula del ratón en el gabinete de bioseguridad. Abra la jaula y agarre suavemente un ratón donante por la cola y colóquelo en la rejilla de metal en la parte superior de la jaula limpia. Coloque la cubierta de la jaula en la parte superior del estante y espere a que el animal defeque.
Recoja los gránulos fecales y póngalos en un tubo cónico estéril de 50 mililitros. Tire de los pellets por sexo. Pesa el tubo de nuevo y calcula el peso de los gránulos fecales.
Prepare una solución estéril agregando una solución de glicerol al 10% a la solución salina normal. Agregue 10 mililitros de esta solución al tubo cónico por cada gramo de pellets fecales. Homogeneice esta mezcla a baja velocidad tres veces durante 30 segundos usando un homogeneizador de mesa dentro de una campana extractora para resuspender las heces.
Filtrar la suspensión fecal a través de dos capas de gasa de algodón estéril. Guarde el filtrado temporalmente en un refrigerador por hasta seis horas, o empaquételo en viales criogénicos estériles y guárdelo en un congelador de menos 80 grados. Limpie a fondo el homogeneizador o la licuadora siguiendo un procedimiento estándar.
Descongele la suspensión fecal congelada en hielo si usa muestras congeladas. Mezclar la suspensión fecal descongelada mediante vórtice. Transfiera la suspensión fecal fresca o descongelada a jeringas de un mililitro.
Pese los ratones y elija el tamaño correcto de la aguja de sonda y el volumen máximo de dosificación. Pruebe la aguja de sonda medindo la longitud desde la punta de la nariz del ratón hasta la parte inferior del esternón. Llene la jeringa con glicerol al 10% en suspensión salina o fecal y retire las burbujas de aire dentro de la jeringa y la aguja.
Coloque una jaula para ratones en el gabinete de bioseguridad. Retire la cubierta de plástico de la jaula y deje la rejilla metálica en su lugar. Abra el estante metálico con una mano.
Agarre un mouse por la cola y colóquelo en el estante de metal. Sostenga el mouse por la cola con una mano y use el pulgar y los dedos medios de la otra mano para sujetar al animal agarrando la piel sobre los hombros. Extienda suavemente la cabeza del animal hacia atrás y sostenga la cabeza en su lugar con una mano.
Coloque la aguja nasogástrica en la parte superior de la lengua dentro de la boca. Avance suavemente a lo largo de la plataforma superior hasta que la aguja llegue al esófago. Pase la aguja suavemente en un solo movimiento.
Una vez que la aguja esté colocada y verificada correctamente, administre lentamente el material empujando la jeringa conectada a la aguja. Después de la dosificación, saque suavemente la aguja. Marque el ratón y devuélvalo a su jaula de origen.
Vigile al animal durante cinco a 10 minutos buscando signos de dificultad para respirar o angustia. Monitorizar de nuevo a los ratones entre 12 y 24 horas después del trasplante de microbiota fecal. El inmunoensayo enzimático reveló que el péptido natriurético tipo B estaba marcadamente elevado en el plasma de ratones deficientes en interleucina 10.
Un trasplante de microbiota fecal de un donante sano mitigó significativamente el aumento de los niveles de péptidos natriuréticos tipo B. La ecocardiografía detectó una disminución significativa en la fracción de eyección del ventrículo izquierdo en los ratones deficientes en interleucina 10 en comparación con los ratones de tipo salvaje. La disminución fue significativamente anulada por el trasplante de microbiota fecal.
Estos hallazgos sugieren que el trasplante de microbiota fecal de un donante sano mitigó la colitis inducida por deterioro cardíaco. Al intentar el protocolo, elegir la aguja de sonda correcta es esencial. Los tubos de alimentación de plástico flexibles podrían ser una mejor opción para los principiantes.
También es importante practicar el manejo de animales antes del sonda nasogástrica.
