Diese Methode kann dazu beitragen, ein ideales Modell zu erstellen, das den natürlichen Verlauf der Knochenmetastasierung von Prostatakrebszellen in vivo genau nachahmt. Diese Technik hat den Vorteil, dass eine Knochenmetastasierung stattfindet und der natürliche Knochenmetastasenprozess von Prostatakrebszellen in vivo dargestellt wird. Diese Technik dient der Erforschung der molekularen Mechanismen und der Untersuchung von in vivo therapeutischen Effekten bei Prostatakrebs-Knochenmetastasen.
Nehmen Sie am Tag der Injektion 80 bis 90 % konfluente Luciferase-markierte PC3-Zellen, die in einer 10-Zentimeter-Zellkulturschale kultiviert wurden, und bereiten Sie die Zellen für die Injektion vor, indem Sie sie zweimal mit kaltem, sterilem PBS waschen. Trypsinisieren Sie die gewaschenen Zellen drei Minuten lang mit 1,5 Millilitern 0,25%Trypsin, danach löschen Sie das Trypsin durch Zugabe von sechs Millilitern F12-Medium mit 10%igem Serum und sammeln Sie die Zellen in einem 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Geben Sie 20 Mikroliter der gesammelten Zellsuspension in eine Zellzählplatte und berechnen Sie die Zellkonzentration mit einem automatischen Zellzähler.
Anschließend werden die Zellen fünf Minuten lang bei Raumtemperatur bei 800 G zentrifugiert.Verwerfen Sie den Überstand mit einer Pipette und resuspendieren Sie das Zellpellet in F12-Medium, um die gewünschte endgültige Zelldichte zu erreichen. Tragen Sie nun die Zellen in den Operationssaal und führen Sie die Zellinjektion innerhalb von zwei Stunden durch. Bewahren Sie die Zellen bis zur Injektion auf Eis auf.
Um mit der Operation zu beginnen, legen Sie die betäubte Maus in Rückenlage und immobilisieren Sie beide oberen Gliedmaßen, indem Sie sie senkrecht von der Mittellinie weg strecken. Immobilisieren Sie die Maus mit chirurgischem Klebeband vom Bauch abwärts, ohne stark zu drücken und die inneren Organe zu verschieben. Desinfizieren Sie die Haut des Brustkorbs mit einem 70%igen Ethanoltupfer.
Als nächstes tasten Sie die Mitte der vorderen Brustwand ab, um den Xipoidfortsatz der Maus in der Vertiefung am untersten Ende des mittleren Brustbeins zu lokalisieren. Markieren Sie den unterlegensten Punkt des Xipoid-Prozesses. Lokalisieren Sie dann durch Abtasten von der Mitte der vorderen Brustwand aus die Halskerbe der Maus in der zentralen Vertiefung am oberen Rand des Manubriums und markieren Sie den untersten Punkt der Halskerbe.
Suchen und markieren Sie nun den Mittelpunkt zwischen den beiden vorherigen Markierungen, leicht nach rechts und knapp über dem Herzen im dritten Zwischenrippenraum. Dies ist der Einspritzpunkt. Mischen Sie die Zellsuspension gründlich, bevor Sie 200 Mikroliter der Suspension in eine Ein-Milliliter-Spritze füllen, die mit einer 26-Gauge-Nadel montiert ist.
Lassen Sie etwas Luft in der Spritze zwischen dem Kolben und der Suspension, damit während der Injektion pulsierendes Blut eindringen kann. Um die Injektion durchzuführen, führen Sie die Nadel vertikal durch die Injektionsstelle. Wenn die Nadelspitze korrekt in die linke Herzkammer eingeführt wird, ist hellrotes, pulsierendes Blut in der Nadelnabe sichtbar.
Wiederholen Sie die Injektion, wenn die Blutpulsation nicht sichtbar ist oder das Blut gerinnt. Sobald die Nadel richtig eingeführt ist, injizieren Sie 100 Mikroliter der Zellsuspension sehr langsam über 40 bis 60 Sekunden mit einer stabilen Hand. Ziehen Sie nach Abschluss der Injektion die Nadel zurück, während Sie mit einem trockenen Wattestäbchen 15 Sekunden lang Druck auf die Injektionsstelle ausüben, um die Hämostase zu gewährleisten.
Bringen Sie die Maus in den sauberen Käfig zurück und überwachen Sie das Tier, bis es sich vollständig von der Narkose erholt hat. Die Biolumineszenz-Bildgebung, die 24 Stunden nach der Injektion von Luciferase-markierten PC3-Zellen in die Maus durchgeführt wurde, zeigte Signale aus dem gesamten Körper des Tieres, die auf das Vorhandensein von Krebszellen im systemischen Kreislauf hindeuten. Metastasierte Läsionen traten zwei Wochen nach der Injektion in den Hinterbeinen der Maus auf.
Die metastasierten Läsionen wurden im Laufe der Zeit größer und traten an anderen Stellen auf. Die durch Prostatakrebszellen induzierten metastasierenden Läsionen in den Knochen wurden außerdem mittels Röntgenaufnahmen nachgewiesen, die eine Knochenzerstörung in der proximalen Tibia des Tieres zeigten. Dies wurde auch durch Mikro-CT-Scans bestätigt.
Die metastasierten Läsionen wurden in paraffinhaltigem Gewebe durch Hämatin- und Eosinfärbung bestätigt. Eine genaue Injektionsstelle ist sehr wichtig, um die Erfolgsquote dieses Modells zu gewährleisten. Dies kann durch Übung erreicht werden.
