Name: murine distal colostomy, a novel model of diversion colitis in c57bl/6 mice
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Alle hier beschriebene Methoden wurden vom zuständigen Veterinär Regierung (Forschungsdefizite Für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit Und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern (LALLF M-V)) genehmigt.
1. präoperative Pflege und Vorbereitung des Tieres
<ol><li>Bei der Ankunft in der Tierstation Teile von Tieren (C57Bl/6) in Gruppen von ähnlicher Größe, Käfig jede Gruppe zusammen und Gruppen während der Experimente konstant zu halten. Hinweis: Verwenden Sie Tiere des gleichen Geschlechts. Beschriebenen Ergebnisse wurden bei männlichen Mäusen. Hinweis: Wenn männliche Tiere verwendet werden, Käfig Gruppen zusammen ab, wenn sie 7 Wochen alt sind, so dass eine Hierarchie aufgebaut werden kann, minimiert so das Risiko von aggressivem Verhalten während der Experimente.</li>
	<li>Mindestens eine Woche vor der Operation zu wechseln, um eine hohe Energie (> 14 MJ/kg) und proteinreiche (> 20 %) feed mit allen essentiellen Spurenelementen und Vitaminen (siehe Materialliste). Hinweis: Versichern Sie alle Mäuse wiegen mindestens 25 g, wenn Chirurgie durchgeführt wird.</li>
	<li>Anästhesie und Analgesie durch intraperitoneale Injektion von Ketamin (87 mg/kg i.p) und Xylazin-Hydrochlorid (13 mg/kg i.p) induzieren. Warten Sie, bis die Maus mechanische Stimulation, z.B. Zehe Stellplatz ohne motorische Reaktion toleriert.</li>
	<li>Sichern Sie die narkotisierte Maus mit Bändern in Rückenlage auf einer Wärme-Unterlage aufgestellt am Schreibtisch Betrieb garantieren stabile Positionierung während des Betriebs und die Vermeidung von einem überwältigenden Verlust von Körperwärme. Hinweis: Die Hitze-Unterlage sollte eine Temperatur von 36 ° C bis 40 ° C haben; die Operating Raumtemperatur sollte 21 ° C.</li>
</ol>(2) distale Kolostomie Betrieb
<ol><li>Der Bauch Haare zu rasieren. Desinfizieren Sie vor Beginn der Operation das Operationsfeld dreimal mit Alkohol 70 % und eine jodophor. Drapieren Sie das Operationsfeld zu aseptischen Bedingungen garantieren.</li>
	<li>Führen Sie eine 15 mm mediane Laparotomie durch Einritzen der Bauchmuskulatur und das Bauchfell entlang der Linea Alba, Blutverlust minimiert.</li>
	<li>Verwenden Sie zwei DeBakey atraumatische Pinzetten, ziehen Sie vorsichtig den Blinddarm, terminal Ileum und aufsteigend und Colon transversum aus der Bauchhöhle. Hinweis: Seien Sie vorsichtig, mechanische Manipulation des Darms zum Schutz vor Verletzungen, mesenterialen Strukturen strikt zu begrenzen.</li>
	<li>Identifizieren Sie den cecal Mast, der aufsteigende Dickdarm und Dünndarm (Abbildungen 1a und 1 b). Hinweis: Korrekte Identifizierung des aufsteigenden Dickdarms ist von grundlegender Bedeutung für die korrekte Platzierung der Kolostomie. In Fällen, wo die Anatomie der Ileocecal Region nicht eindeutig ist, das Vorhandensein von Peyer Patches identifiziert den Dünndarm, und das Vorhandensein von geformten Stuhl kennzeichnet den Doppelpunkt.</li>
	<li>Verwenden Sie ein Lineal, um die Position der zukünftigen Kolostomie bestimmen. Es sollte 20 mm distal der Ileocecal Ventil für eine distale Kolostomie platziert werden.</li>
	<li>Machen Sie einen zweiten 3-mm-Schnitt in der Bauchdecke in der oberen rechten Quadranten. Ziehen Sie die zuvor identifizierten Doppelpunkt-Segment durch diesen Schnitt zu einer Schleife, wobei Sie darauf achten, nicht um die Schleife zu verzerren.</li>
	<li>Übergeben Sie sorgfältig eine flexible i.v. 22-Gauge-Kanüle durch das Mesocolon. Achten Sie darauf, nicht um mesenterialen vaskuläre Strukturen zu beschädigen.</li>
	<li>Den Darm in die Bauchhöhle zurück.</li>
	<li>Befestigen Sie beide Enden des Schlauches auf der Haut mit einfachen Stichen und einer resorbierbaren Naht (z.B., Polyglactin 910 oder Polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>Führen Sie vor dem Schließen der Laparotomie, Fluid Reanimation mit einer intraperitonealen Injektion von 0,5 mL 0,9 % Kochsalzlösung.</li>
	<li>Schließen Sie das Peritoneum und die Muskelschicht mit einer kontinuierlichen Naht mit einer resorbierbaren Naht (z. B. Polyglactin 910 oder Polyfil 4-0 1/2 c). Schließen Sie die Haut mit einer kontinuierlichen Naht mit einer resorbierbaren Naht (z. B. Polyglactin 910 oder Polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>Öffnen Sie die exteriorized Doppelpunkt Schleife durch Ausführen einer Zwischensumme Durchtrennung mit einer feinen Schere. Vermeiden Sie alle Verletzungen, das Mesenterium. Den Doppelpunkt nicht vollständig Transekt.</li>
	<li>Jede Kolostomie Öffnung durch drei einzelne voll Dicke Nähte, das Peritoneum zu beheben und die Haut mit einem Monofil, resorbierbaren Naht (z.B.Polydioxanon oder Monofil 6-0 3/8 s). Der afferenten Schleife, die eine funktionelle Ende-Kolostomie ist, und die ableitenden Schleife, die eine schleimige Fistel ist, sind klar getrennt, an dieser Stelle (Abbildung 1 c). Hinweis: Betriebszeit weniger als 20 Minuten sollte die Flüssigkeit und thermische Verluste zu begrenzen.</li>
	<li>Nach Beendigung der Operation, Desinfektion von Instrumenten mit einem Aldehyd-freie Desinfektionslösung in ein Ultraschallbad gemäß den Anweisungen des Herstellers.</li>
</ol>(3) Sham-Betrieb (Colotomy)
<ol><li>Führen Sie Schritte 1.1. durch 2.4.</li>
	<li>Verwenden Sie ein Lineal zur Bestimmung der zukünftigen Colotomy. Die Colotomy sollte den gleichen Abstand vom Ileocecal Ventil wie die Kolostomie in der experimentellen Gruppe positioniert werden.</li>
	<li>Öffnen Sie den Dickdarm zu mindestens zwei Dritteln seines Umfangs mit einer feinen Schere.</li>
	<li>In der Nähe der Colotomy mit einer einzigen Schicht voll-Dicke unterbrochen Naht mit einem Monofil, resorbierbaren Naht (z. B. Polydioxanon, Monofil 6-0 3/8 s). Hinweis: Betriebszeit sollte weniger als 20 Minuten für einen erfahrenen Operateur, flüssig und thermische Verluste zu begrenzen.</li>
	<li>Führen Sie Schritte 2.10. , 2.11. und 2.14.</li>
</ol>4. postoperative Pflege
<ol><li>Tiere in ihren Käfigen zurück. Sorgen für eine wohltemperierte Atmosphäre von 37 ° C (z.B.mit einer Infrarotlampe) bis Mäuse ganz wach sind. Dann halten Sie Mäuse in einer Umgebung von Temperatur und Feuchtigkeit reguliert (21 ° C; 30 % ± 10 % Relative Luftfeuchtigkeit). Freien Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser zu ermöglichen. Um flüssige Aufnahme zu erleichtern, bieten Sie zusätzliche Wasser getränkten Tierfutter.</li>
	<li>Postoperative Analgesie durch die Injektion von 0,1 mg/kg Körper Gewicht Buprenorphin beginnen s.c. wenn Tiere Reaktion auf mechanische Stimulation zeigen. Seien Sie vorsichtig, Atemdepression zu vermeiden.</li>
	<li>Ergänzen Sie Trinkwasser mit 1 mg/mL Tramadol für kontinuierliche Analgesie während der ersten postoperativen Woche.</li>
	<li>Als Ausgleich für verminderte Flüssigkeitsaufnahme aufgrund eingeschränkter Mobilität, liefern eine solide trinken Pad im Käfig während der ersten postoperativen Woche.</li>
	<li>Wiegen der Tiere und Partitur Tierverhalten täglich während der ersten Woche jeden zweiten Tag während der Rest des ersten Monats und jeden dritten Tag im zweiten Monat mit der Krankheit schwere Partitur in Kleinwort Et Al. beschrieben 6.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream.">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li><li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gastrointestinal Pathology. , (1972).</li><li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversion+colitis.+A+prospective+study.">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li><li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. 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Alle Autoren erklären, dass sie keine Interessenskonflikte.

Mausmodell der DC präsentiert in diesem Protokoll zuverlässig reproduziert die histopathologische Merkmale des menschlichen DC (z. B., de Novo Entwicklung der lymphatischen Follikeln in der Submukosa der entzündeten Darm Segmente, Krypta, die Verkürzung und Senkung der Goblet Zelle Zahlen). Abgesehen von diesem Vorteil dieses Modell wird durch eine sehr ähnliche auslösende Faktor induziert und präsentiert mit einer klinischen Verlauf von mäßigen bis leichten schwere, wie der Fall in den am stärksten betroffenen Menschen ist.
Um reproduzierbare Ergebnisse und akzeptable Perioperative Letalität zu erhalten, ist einige Übung in mikrochirurgischen Techniken notwendig. Jedoch kann Kolostomie und Sham Betrieb (Colotomy) mit sehr geringen perioperativen Sterblichkeit durchgeführt werden (< 10 %). Einige Arbeitsschritte sind von großer Bedeutung: 1) Doppelpunkt und Terminal Ileum positiv zu identifizieren. In Fällen, wo die Anatomie der Ileocecal Region nicht klar, erkennbar durch die Anwesenheit von geformten Stuhl und terminal Ileum Dickdarm durch die Anwesenheit von Peyer Patches. (2) bei die Kolostomie Schleife exteriorizing, versichern Sie, dass das Mesenterium nicht verdreht ist, wodurch mesenterialen Ischämie und mechanischen Ileus. (3) Wenn das Mesenterium mit den biegsamen Schlauch punktieren, versichern Sie, dass ein Schiff-freien Sektor ausgewählt ist, verhindert Blutungen und mesenterialen Ischämie. (4) Wenn den kleinen Schnitt in der Bauchdecke erstellen, überprüfen Sie für ausreichende Blutstillung. Verwenden Sie ggf. Thermo-Koagulation um von Muskel Schiffe Blutung zu stoppen. (5) versichern Sie das Kolon Schleife öffnen mindestens zu zwei Drittel seines Umfangs ist und der hintere Wand ausreichend verwirklicht ist, gewährleistet eine vollständige Blockade der Hocker Durchgang auf die distale Darm-Segmente. (6) versichern Sie, dass beidseitig Kolostomie gut auf der Haut zu vermeiden, einen offenen Durchgang in der Bauchhöhle, wodurch höhere Infektionsgefahren oder einen mechanischen Ileus weil die fäkale Stream verlassen kann nicht behoben werden. Normalerweise können alle chirurgischen Eingriffe ohne Lupen oder Operationsmikroskopen durchgeführt werden. Nutzung dieser Geräte erfordert im allgemeinen Weiterbildung.
Auch wenn die Komplexität der chirurgischen Eingriffe nur moderat ist, gibt es viele wesentliche Operative und Perioperative Probleme erfolgreich zu beenden, das Experiment mit reproduzierbaren Ergebnissen berücksichtigt werden.
Es ist wichtig für das langfristige Überleben mit einer permanenten Kolostomie, dass Mäuse eine intakte Blinddarm haben. Eine experimentelle Gruppe mit proximalen verdauungsbrei angrenzend an das Ileocecal Ventil zeigte eine Mortalität von 100 % in der ersten postoperativen Woche wegen irreversible Gewichtsverlust (Daten nicht gezeigt). Daher ist es von größter Bedeutung für die Kolostomie Seite mindestens 20 mm distal aus der begründete Ventil zu wählen. Diese Beobachtung kann aufgrund der Physiologie der Verdauung Nager sein. Retrograder Transport von der proximalen Colon, der Blinddarm tritt bei dieser Spezies. Der Blinddarm ist, wo die Synthese von Nährstoffen durch die bakteriellen Mikroflora-occurs8. Normal MCV und MCH Werte während Langzeitstudien zeigen, dass Tiere mit distalen verdauungsbrei nicht an bedeutenden Vitaminmangel leiden. Koprophagie ist darüber hinaus ein wesentlicher Bestandteil das Ernährungsverhalten von Nagetieren in ihrem natürlichen Lebensraum. Wenn das Modell zu etablieren, waren wir sehr besorgt, dass sind die Koprophagie als Folge das Vorhandensein einer permanenten Kolostomie führen könnten, Ernährungsmängel, (z.B. Vitamin B). Jedoch während es ein Problem unter Bedingungen ist, wo Zugang zu Nährstoffen beschränkt, hat sich zuvor gezeigt, dass Koprophagie verliert seine Ernährungsphysiologische Bedeutung unter experimentellen Bedingungen mit freien Überschuss an Wasser und ernährungsphysiologisch ausgewogene Nahrung9 . Unter unseren experimentellen Bedingungen ist es wichtig, die Bedingungen der postoperative Nahrungsaufnahme zu optimieren. Wir verwendeten Futtermittel, die hatte eines hohen Eiweißgehalt, optimierte Protein-Qualität und erhöhte Energiedichte. Tiere wurden mindestens zwei Wochen vor der Operation zu dieser Diät akklimatisiert. Postoperativ, bot Wasser getränkten Futter Ad Libidum zu erleichtern Nahrung und Flüssigkeitszufuhr.
Es ist entscheidend für die Mäuse des gleichen Geschlechts in der experimentellen und Sham Gruppen nutzen. Sex hat nachweislich wesentlich beeinflussen den Verlauf einer systemischen Entzündung, sondern auch der Darmentzündung in verschiedenen chemisch induzierten Kolitis Modelle10,11,12. Männliche Tiere werden in der Regel ausgeprägter Erkrankung mit größeren Entzündung mehr Krypta Schaden, weniger Regeneration, höhere Pro-inflammatorischen Zytokinen und langsamer Rückforderungen von Gewicht-Verlust-10entwickeln. Ein weiterer Vorteil der Verwendung von männlicher Tieren ist besser Alter abgestimmt präoperative Körpergewicht, was zu besseren Ausgleich der ersten postoperativen Gewicht Verlust Periode. Weibliche Mäuse können jedoch im Protokoll verwendet werden, wenn bestimmte Fragen (z.B., der Einfluss des Geschlechts Hormone auf die Manifestation der DC müssen behandelt werden. Mit Hilfe von männlichen Mäusen erfordert mehr Aufwand bei der Aufrechterhaltung der stabile Wohnverhältnisse. Männliche Mäuse sind anfälliger für aggressiven Interaktionen zu Verletzungen und zum Tod führen. Männliche Mäuse leben in etablierten Hierarchien mit einem dominanten Männchen. Sobald die Hierarchie in der Gruppe besteht, ist die anhaltenden Kampfhandlungen seltener13,14. Aus diesem Grund wir mindestens zwei Wochen vor der Operation die experimentellen Gruppen bei der Ankunft der Mäuse in unserer Tierstation gebildet und gepflegt diese Gruppen bis Experimente beendet. Im allgemeinen wurden experimentelle Gruppen von 5 bis 7 Tiere in einem Käfig gehalten. Wartung der stabile soziale und Wohnbedingungen war von größter Bedeutung nicht nur für das aggressive Verhalten von Versuchstieren zu minimieren. Gehäuse Bedingungen haben gezeigt, dass Gewichtszunahme sowie immunologische Parameter15,16,17beeinflussen.
Anfälligkeit für chemisch induzierte und genetisch veränderten ulcerosa Modelle variiert erheblich zwischen Maus Stämme18,19,20. Dieses Protokoll wurde bei C57Bl/6 Mäusen, eine Maus-Sorte mit einem klar definierten genetischen Hintergrund und ein gut charakterisierten Immunsystem21,22,23 , die mittlere bis starke zeigt entzündliche Reaktion in der Dextran Sulfat Natrium-induzierte Kolitis Modell20 und gilt als eine prototypische Th1 Stamm23. Die Verwendung von anderen Mausstämme kann betrachtet werden, wenn schwerer Krankheit Aktivitäten oder eine Th2-Umgebung erforderlich ist.
Zusammenfassend lässt sich sagen stellt unser Protokoll ein wertvolles Instrument für die Beurteilung der Rolle der verschiedenen Immunzellen, Zytokine, Chemokine und andere Signalisierung Moleküle in der Pathogenese der DC. Eine große Anzahl von genetisch veränderten Mäusen Modelle gibt es mit dem C57BL/6-Hintergrund und können mit unserem Modell kombiniert werden (z.B., Mäuse mangelhaft für IL-17, IL-10, Chemokin CXCL13, Chemokin-Rezeptoren CXCR5 und CCR7 und Sphingosine-1-Phosphat Rezeptor 4). Die Verfügbarkeit von Congenic Mausstämme auf dem C57BL/6 Hintergrund weitgehend erleichtern Transfer Experimente, die Rolle der unterschiedlichen Zelltypen beteiligt in der Ätiologie von DC zu etablieren. Zu guter Letzt bietet das Modell die Möglichkeit zur Bewertung des Einflusses von lokalen Eingriffen (z.B.Änderung der lokalen Mikrobiom und lokale antientzündliche Therapie) auf Schleimhaut Immunität im Darm von betroffenen und nicht betroffenen Segmente und systemische immun-Homöostase.

In den letzten Jahren eine beträchtliche Anzahl von nicht-infektiösen Kolitis Entitäten anders als klassische entzündliche Darmerkrankungen (Fahrradhändler; dh., Crohn Krankheit oder Colitis Ulcerosa) sind klinisch und histopathologisch beim Menschen charakterisiert. Die pathophysiologischen Mechanismen, die zur Entwicklung dieser ulcerosa Formen sind teilweise nicht vollständig verstanden, weil geeignete Tiermodellen knapp sind. Ablenkung Colitis ist einer dieser kürzlich beschriebenen Entitäten. Obwohl der Begriff im Jahr 1980 von Schlachter1geprägt war, wurde die Erstbeschreibung einer ähnlichen Phänotyp Morson21972 zugesprochen. Die Krankheit entwickelt sich in 50 % bis 91 % der Patienten mit Umleitung Enterostomy, und seine klinische Intensität variiert3,4. Die jährliche Inzidenz von rund 120.000 Kolostomie Patienten in den Vereinigten Staaten von Amerika gegeben, stellt dieser Krankheit Einheit ein wichtiges Gesundheitsproblem.
Das übergeordnete Ziel dieses Protokoll zu entwickeln war, ein DC-Mausmodell, das stützt sich auf eine Kolitis Trigger ähnlich gesehen im menschlichen DC und reproduziert, die die primäre histopathologischen Merkmale der menschlichen Krankheit. Im Gegensatz zu anderen Modellen murinen Kolitis ulcerosa Induktion in unserem Modell erfordert keine gentechnisch veränderte Tiere (z.B., IL-7 Transgene Mäuse, N-Cadherin dominant negativen Mäuse oder TGFβ- / - Mäusen), die Anwendung von chemisch reizende Stoffe (z.B. Dextran Sulfat Natrium (DSS) - induzierte Kolitis oder Trinitrobenzene sulfonsäure (TNBS) - induzierte Kolitis) oder die Übertragung von bestimmten Zellpopulationen immun mangelhaft Mäusen (wie in der CD45RBhohe Übertragungsraten Modell der Kolitis) (eine Übersicht finden Sie unter5). Im Gegensatz zu anderen Modellen erlaubt intakte Immunsystem unseres Modells DC Einschätzung des immunologischen Mechanismus DC Entwicklung beteiligt. Die Begrenzung der Schleimhaut Entzündung zum Segment ausgeschlossenen Darm ermöglicht die Bewertung des seine Rückwirkung auf Schleimhaut Immunität in andere Teile des Gastrointestinaltraktes, auf die immun Homöostase in anderen immun Abteilungen des Verdauungstraktes (z.B. , Peyer Patches und Mesenteriale Lymphknoten), und auf das Immunsystem Homöostase des gesamten Organismus. Schließlich bildet unser Modell ein geeignetes Instrument für die Untersuchung der Mechanismen, die lokale entzündliche Reize aus Veränderungen in der normalen Umgebung für sowohl die lokalen Microbiome sowie nährende Antigene zu kontrollieren.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;Operation material&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>heat underlay, 6 watt</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70% (with methylethylketon)</td><td>Pharmacie of the University Hospital Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length</td><td>Centramed GmbH, Germany</td><td>8308370</td><td>for disinfection of operation field</td></tr><tr><td>Scissor</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Atraumatic DeBakey forceps</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety &lt;em&gt;i.v.&lt;/em&gt; cannula 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>VCP994H</td><td></td></tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Germany</td><td>18824-01</td><td>disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Medications&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine)</td><td>Bayer, Germany</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 mg/kg &lt;em&gt;s.c.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride)</td><td>Gr&amp;uuml;nenthal GmbH, Germany</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL drinking water</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)&amp;nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Germany</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg body weight &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>metronidazole 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 mg/kg body weight &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Food&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Germany</td><td>&amp;nbsp;V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches</td><td>TripleATrading, the Netherlands</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td>light microscopy</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&amp;nbsp;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Veterinary hematology analyzer of 50 &amp;micro;l venous EDTA-blood</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath)</td><td>Bandelin electronics, Germany</td><td>RK 100 H</td><td>disinfection of surgical instruments</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Software&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine distal colostomy, a novel model of diversion colitis in c57bl/6 mice

Ablenkung Colitis (DC) ist eine häufige klinische Zustand auftreten bei Patienten mit Darm-Segmente aus dem fäkal Strom durch eine kurzweilige Enterostomy ausgeschlossen. Die Ätiologie dieser Erkrankung unterscheidet sich von der klassischen entzündlichen Darmerkrankungen wie Morbus Crohn und Colitis ulcerosa scheint aber bleibt unklar. Forschungsarbeiten zu entschlüsseln, die pathophysiologischen Mechanismen, die zur Entwicklung dieser Krankheit wurde stark durch das Fehlen einer entsprechenden Mausmodell behindert. Dieses Protokoll generiert ein Mausmodell der DC, der die Untersuchung der Rolle des Immunsystems und seine Wechselwirkung mit der Microbiome bei der Entwicklung von DC erleichtert. In diesem Modell mit C57BL/6 Tiere sind distalen Teile des Dickdarms aus dem fäkal Strom ausgeschlossen, durch die Schaffung einer distalen Kolostomie, die Entwicklung von leichten bis mittelschweren Entzündung in den Segmenten ausgeschlossenen Darm auslösen und Markenzeichen Läsionen der menschlichen Reproduktion DC mit einem moderaten systemische entzündliche Reaktion. Im Gegensatz zu der Rattenmodell gibt es eine große Anzahl von genetisch veränderten murinen Modelle auf dem C57BL/6-Hintergrund. Die Kombination dieser Tiere mit unserem Modell ermöglicht die möglichen Rollen der einzelnen Zytokine, Chemokine oder Rezeptoren von bioaktiven Moleküle (z. B.Interleukin (IL)-17; Il-10, Chemokin CXCL13, Chemokin-Rezeptoren CXCR5 und CCR7 und Sphingosine-1-Phosphat-Rezeptor 4) in der Pathogenese der DC beurteilt werden. Die Verfügbarkeit von Congenic Mausstämme auf dem C57BL/6 Hintergrund erleichtert weitgehend Transfer Experimente durchführen, um die Rollen der unterschiedlichen Zelltypen beteiligt in der Ätiologie von DC zu etablieren. Schließlich bietet das Modell die Möglichkeit, die Einflüsse der lokalen Interventionen (z.B. Änderung der lokalen Microbiome oder lokale antientzündliche Therapie) zu bewerten auf Schleimhaut Immunität im Darm von betroffenen und nicht betroffenen Segmente und die auf systemische immun Homöostase.

Operation ist gut verträglich, sowohl in der experimentellen (Kolostomie) und Schwindel (Colotomy) Gruppen. Perioperative Mortalität sollte 10 % nicht überschreiten, wenn Chirurgie und Perioperative Management korrekt durchgeführt wird. In der ersten postoperativen Woche sieht erheblichen Gewichtsverlust in der experimentellen und Sham Gruppen. Tiere der Sham-Gruppe erreichen ihre Gewicht Tiefpunkt in der Regel in Richtung der vierten postoperativen Tag, aber es tritt einen Tag später in der experimentellen Gruppe. Gewichtsverlust ist stärker ausgeprägt in der experimentellen Gruppe, 21,7 % des ursprünglichen Körpergewichts erreicht. Im Gegensatz dazu verlieren Schein Tiere 10,8 % ihrer ursprünglichen Körper Gewicht (Abbildung 2)6. Nach dem Gewicht Tiefpunkt in der ersten postoperativen Woche steigt Körpergewicht stetig in beiden experimentellen Gruppen, aber mit einer langsameren Steigung in der experimentellen Gruppe. Anzeichen und Symptome einer schweren Darmentzündung (d.h., blutige Entladung oder flüssiger Stuhlgang auftreten, weder in der experimentellen noch der Sham-Gruppe-6). Gesamtmortalität während der ersten 60 Tage ist postoperativ rund 40 % in der Gruppe Kolostomie und ca. 10 % in der Colotomy-Gruppe. Die meisten Todesfälle treten während der ersten postoperativen Woche (61 % in der experimentellen Gruppe, 66 % in der Sham-Gruppe). Todesursachen sind in Abbildung 3dargestellt.
Distale Kolostomie bei Mäusen führt die Entwicklung vorwiegend lymphozytären Kolitis der typischen histologischen Merkmale des menschlichen DC zu reproduzieren. Diese Veränderungen erhöhen mit der Dauer der Darm Ausschluss. Krypta Länge in ausgeschlossenen Darm Segmenten deutlich verkürzt. Diese Verkürzung erreicht statistischen Signifikanz nach 14 Tagen der fäkale Ablenkung (Abb. 3a). Die Becher-Zelle-lagerlänge Krypta wird nach 30 Tagen in ausgeschlossenen Darm Segmenten (Abb. 3 b) reduziert. Absolute Goblet Zelle Zahlen sinken auch beträchtlich in Krypten im Segment ausgeschlossenen Darm nach 14 postoperativen Tagen (Abb. 3 c). Die Markenzeichen Läsion der DC, die Entwicklung der lymphatischen Follikeln in der Schleimhaut, erfordert eine längere Dauer der Hocker Abweichung. Obwohl eine erhöhte Anzahl von lymphoide Follikel bereits nach zwei Wochen beobachtet werden kann, werden Unterschiede erhebliche nach zwei Monaten (Figuren 5a-c). Alle beschriebene vor histopathologische Veränderungen sind stärker ausgeprägt als in proximalen Regionen der ausgeschlossenen Darm Segmente distalen. Eine typische neutrophile Infiltrat als Zeichen einer akuten Entzündung (Zahlen 5 d-e) in der Regel nicht eingehalten ist.
Als ein Zeichen für eine systemische Auswirkungen des lokalen Darmentzündung sind Neutrophilenzahl zählt bei Kolostomie Tieren bereits 14 Tage nach der Operation deutlich zu. Dieser Unterschied bleibt bis zum Ende der Beobachtungszeit (60 Tage). Thrombozytenwerte sind leicht gestiegen, bei Tieren mit Kolon Abzweigung nach 60 Tagen (Abbildung 6). Hämoglobinwert und Hämatokrit werden 14 Tage nach der Operation in der Kolostomie-Gruppe im Vergleich zu der Sham-Gruppe reduziert.
Es hat sich gezeigt, dass Vitamin-Mangel in Nagetieren Ursachen reduziert mittleren korpuskulären Volumens (MCH) und meine Korpuskuläre Hämoglobin (MCV) Werte7. In unserem Modell sehen wir anfängliche Anstieg des beide Parameter nach 14 bis 30 Tagen. MCV und MCH zurück auf normale Werte nach längeren Follow-up (Abbildung 7). Dies zeigt, dass das distale Kolostomie während Langzeitstudien nicht zu klinisch signifikanten Vitamin-Mangel führt.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig1.jpg"> Abbildung 1: Anatomie der cecal Region und den chirurgischen Eingriff. (a) grafische Darstellung der postoperative Anatomie. (b) Topographie des cecal Pol und anatomischen Landmarken. (c) grafische Darstellung der Kolostomie Öffnungen. Abbildung 1a wurde von Kleinwort Et Al.6geändert. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig2.jpg"> Abbildung 2: Body Gewicht Entwicklung. Körpergewicht wird als Prozentsatz des präoperativen Körpergewichts angezeigt. Der Körper Gewicht Kurven Kolostomie und sham (Colotomy) Tiere zeigen, die die ersten postoperativen Gewichtsverlust signifikant höher in der Kolostomie-Gruppe im Vergleich zu der Sham-Gruppe (p < 0,001 war). Werte sind Mittel ± Standardfehler des Mittelwerts über 21-26 Tiere pro Gruppe (21 Tiere erhalten verdauungsbrei; 26 Tiere waren in der Sham-Gruppe). Diese Zahl wurde von Kleinwort Et Al.6geändert. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig3.jpg"> Abbildung 3: Ursachen des Todes. Komplikationen als Prozentsätze der Gesamtmortalität dargestellt werden und sind in einem Kreisdiagramm (Fraktion Kolostomie (a), (b) Schein) dargestellt. Postoperative Komplikationen wurden durch Autopsie ermittelt. Wasting-Syndrom wurde als kontinuierliche Gewichtsabnahme größer als 33 % des ursprünglichen Körpergewichts und keine anderen Befunde bei Autopsie definiert. Ileus und Anastomosen Leckage bei Autopsie diagnostiziert. Stoma Komplikationen wurden als parastomale Abszesse und mukokutane Trennungen definiert. Andere Komplikationen umfasste Wunde Dehiszenz der Laparotomie, Ischämie der Blinddarm und Fällen nicht klar auf Autopsie. Signifikante Unterschiede in der Verteilung der postoperativen Komplikationen wurden gesehen zwischen den Gruppen (p = 0,021, mit der exakten Fisher-Test für zweiseitige Analyse von bis zu 6 × 6 Kontingenztabellen analysiert). Es gab 39 Tiere in der Gruppe Kolostomie und 29 in der Sham-Gruppe. Diese Zahl wurde von Kleinwort Et Al.6geändert. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig4.jpg"> Abbildung 4: Krypta Länge und Goblet Zelle Bevölkerung. Krypta Länge und Goblet Zelle Zahlen wurden mit Paraffin Abschnitte des Mastdarms nach Perjodsäure-Schiff Färbung bestimmt. (a) Krypta Länge war im Rektum von Tieren mit Umleitung Kolitis (DC) deutlich verringert. (b) die Länge des Rayons Goblet Cell-Lager der Krypta wurde gemessen und als Verhältnis der vollen Krypta Länge. Dreißig bis sechzig Tagen wurde der Anteil der Krypta tragende Länge Becherzellen postoperativ, in der DC-Gruppe verringert. (c) Becher Zellzahlen wurden in DC Tiere im Vergleich zu der Sham-Gruppe deutlich reduziert. Diagramme in (a) bis (c) zeigen Mittel und Standardfehler über 5 bis 9 Tiere pro Gruppe (Kolostomie 14 und 30 Tage, 14 Tage sham: n = 8; Kolostomie 60 Tage: n = 5, 30 und 60 Tagen sham: n = 9); ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. Diese Zahl wurde von Kleinwort Et Al.6geändert. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig5.jpg"> Abbildung 5: lymphoide Follikel und entzündliche Infiltrate. (a) lymphoide Follikel umgeleitete Doppelpunkte und Sham Tiere wurden auf Paraffin Abschnitte des Mastdarms gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin gezählt. Das Diagramm zeigt Mittel und Standardfehler über 5 bis 9 Tiere pro Gruppe (Kolostomie 14 und 30 Tage, 14 Tage sham: n = 8; Kolostomie 60 Tage: n = 5, 30 und 60 Tagen zu steuern: n = 9), ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. (b) und (c) Vertreter Beispiele für Abschnitte des Mastdarms Kolostomie (b) und (c) Schein Tiere 60 Tage postoperativ gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin. Eine prominentere lymphoide Follikel (∗) war in der Schleimhaut eine Kolostomie-Maus. Maßstabsleisten stehen 100 µm. (d) und (e) Färbung mit Chloroacetate Esterase Reaktion auf Paraffin Abschnitten wurde durchgeführt, um die Neutrophilen Granulozyten erkennen. Auf Querschnitten des umgeleiteten Mastdarms wurde eine Akute entzündliche neutrophile Infiltrat Kolostomie-Gruppe (d) weder im Schein Tiere (e) bis auf 60 Tage postoperativ beobachtet. Maßstabsleisten darstellen 100 µm. Diese Zahl wurde von Kleinwort Et Al.6geändert. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig6.jpg"> Abbildung 6: Anzahl der Neutrophilen und Thrombozyten. Blutwerte von venöser Blutproben wurden von einem Veterinär Hämatologie-Analysator bestimmt. (a) Neutrophilen Grafen wurden in die Kolostomie-Gruppe im Vergleich zu Schein Tieren bis zu 60 Tage postoperativ signifikant erhöht. (b) die Thrombozytenwerte waren leicht in der Kolostomie Gruppe 60 Tage postoperativ erhöht. Das Diagramm zeigt Mittel und Standardfehler über 5 bis 9 Tiere pro Gruppe (Kolostomie 14 und 30 Tage, 14 Tage sham: n = 8; Kolostomie 60 Tage: n = 5, 30 und 60 Tagen sham: n = 9), ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig6large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57616/57616fig7.jpg"> Abbildung 7: Erythrozyten-Parameter. Blutwerte von venöser Blutproben wurden von einem Veterinär Hämatologie-Analysator bestimmt. (a) Hämoglobin und Hämatokrit (b) wurden in der Kolostomie-Gruppe im Vergleich zur Sham-Gruppe deutlich verringert. (c) mittlere Korpuskuläre Volumen (MCH) war deutlich erhöhten 14 und 30 Tage nach der Operation in der Kolostomie-Gruppe im Vergleich zu der Sham-Gruppe kehrte aber normal nach 60 Tagen. (d) mittlere Korpuskuläre Hämoglobin (MCV) Werte wurden erhoben, nach 30 Tagen aber nicht mehr nach 60 Tagen nach der Operation in der Kolostomie-Gruppe im Vergleich zu Tieren sham. Das Diagramm zeigt Mittel und Standardfehler über 5 bis 9 Tiere pro Gruppe (Kolostomie 14 und 30 Tage, 14 Tage sham: n = 8; Kolostomie 60 Tage: n = 5, 30 und 60 Tagen sham: n = 9), ∗p < 0,05; ∗∗p < 0,01. <a href="/files/ftp_upload/57616/57616fig7large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

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Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Murine distalen Kolostomie, ein neuartiges Modell Ablenkung Colitis bei C57BL/6 Mäusen

Murine distalen Kolostomie bietet ein Mausmodell für menschliche Abzweigung Kolitis, eine vorwiegend lymphozytären Kolitis im Dickdarm-Segment aus dem fäkal Strom ausgeschlossen.

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

12.8K Aufrufe.  Universitätsmedizin Greifswald. Murine distalen Kolostomie bietet ein Mausmodell für menschliche Abzweigung Kolitis, eine vorwiegend lymphozytären Kolitis im Dickdarm-Segment aus dem fäkal Strom ausgeschlossen.

Serie: Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal cancer (CRC) over healthy individuals. This risk is proportional to the duration and extent of disease, with a cumulative incidence as high as 30% in individuals with longstanding UC with widespread colonic involvement.1 Colonic dysplasia in IBD and colitis associated cancer (CAC) are believed to develop as a result of repeated cycles of epithelial cell injury and repair while these cells are bathed in a chronic inflammatory cytokine milieu.2 While spontaneous and colitis-associated cancers share the quality of being adenocarcinomas, the sequence of underlying molecular events is believed to be different.3 This distinction argues the need for specific animal models of CAC.
Several mouse models currently exist for the study of CAC. Dextran sulfate sodium (DSS), an agent with direct toxic effects on the colonic epithelium, can be administered in drinking water to mice in multiple cycles to create a chronic inflammatory state. With sufficient duration, some of these mice will develop tumors.4 Tumor development is hastened in this model if administered in a pro-carcinogenic setting. These include mice with genetic mutations in tumorigenesis pathways (APC, p53, Msh2), as well as mice pre-treated with genotoxic agents (azoxymethane [AOM], 1,2-dimethylhydrazine [DMH]).5 
The combination of DSS with AOM as a model for colitis associated cancer has gained popularity for its reproducibility, potency, low price, and ease of use. Though they have a shared mechanism, AOM has been found to be more potent and stable in solution than DMH. While tumor development in other models generally requires several months, mice injected with AOM and subsequently treated with DSS develop adequate tumors in as little as 7-10 weeks.6, 7 Finally, AOM and DSS can be administered to mice of any genetic background (knock out, transgenic, etc.) without cross-breeding to a specific tumorigenic strain. Here, we demonstrate a protocol for inflammation-driven colonic tumorigenesis in mice utilizing a single injection of AOM followed by three seven-day cycles of DSS over a 10 week period. This model induces tumors with histological and molecular changes closely resembling those occurring in human CAC and provides a highly valuable model for the study of oncogenesis and chemoprevention in this disease.8

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

We demonstrate a protocol in which administration of the genotoxic agent azoxymethane (AOM) followed by three cycles of the pro-inflammatory agent dextran sulfate sodium (DSS) rapidly and consistently generates colon tumors in mice with morphologic and molecular similarities to those seen in human colitis-associated cancer.

Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

Forschung

Medizin

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

This protocol outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and colitis, as well as the methods used to characterize Citrobacter rodentium infection in mice. C. rodentium is a gram negative, murine specific bacterial pathogen that is closely related to the clinically important human pathogens enteropathogenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli. Upon infection with C. rodentium, immunocompetent mice suffer from modest and transient weight loss and diarrhea. Histologically, intestinal crypt elongation, immune cell infiltration, and goblet cell depletion are observed. Clearance of infection is achieved after 3 to 4 weeks. Measurement of intestinal epithelial barrier integrity, bacterial load, and histological damage at different time points after infection, allow the characterization of mouse strains susceptible to infection.
The virulence mechanisms by which bacterial pathogens colonize the intestinal tract of their hosts, as well as specific host responses that defend against such infections are poorly understood. Therefore the C. rodentium model of enteric bacterial infection serves as a valuable tool to aid in our understanding of these processes. Enteric bacteria have also been linked to Inflammatory Bowel Diseases (IBDs). It has been hypothesized that the maladaptive chronic inflammatory responses seen in IBD patients develop in genetically susceptible individuals following abnormal exposure of the intestinal mucosal immune system to enteric bacteria. Therefore, the study of models of infectious colitis offers significant potential for defining potentially pathogenic host responses to enteric bacteria. C. rodentium induced colitis is one such rare model that allows for the analysis of host responses to enteric bacteria, furthering our understanding of potential mechanisms of IBD pathogenesis; essential in the development of novel preventative and therapeutic treatments.

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium infection provides a valuable model to study enteric bacterial infections as well as host immune responses and colitis in mice. This protocol outlines the measurement of barrier integrity, pathogen load and histological damage allowing for the thorough characterization of pathogen and host contributions to murine infectious colitis.

Die<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Studieren Erreger und Wirt Beiträge zur Infectious Colitis

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Immunologie und Infektion

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Colitis can occur from viral or bacterial infections, ischemic insult, or autoimmune disorders; most notably Ulcerative Colitis and the colonic variant of Crohn&rsquo;s Disease - Crohn&rsquo;s Colitis. Acute colitis may present with abdominal pain and distention, malabsorption, diarrhea, hematochezia and mucus in the stool. We are beginning to understand the complex interactions between the environment, genetics, and epithelial barrier dysfunction in Inflammatory Bowel Disease and animal models of colitis have been essential in advancing our understanding of this disease. One popular model involves supplementing the drinking water of mice with low-molecular weight Dextran Sodium Sulfate (DSS), resulting in epithelial damage and a robust inflammatory response in the colon lasting several days 1.Variations of this approach can be used to model acute injury, acute injury followed by repair, and repeated cycles of DSS interspersed with recovery modeling chronic inflammatory diseases 2. After a single four-day treatment of 3% DSS in drinking water, mice show signs of acute colitis including weight loss, bloody stools, and diarrhea. Mice are euthanized at the conclusion of the treatment course and at necropsy dissected colons are processed and can be 'Swiss rolled" 3 to allow microscopic analysis of the entire colon or infused with formalin as "sausages" to allow macroscopic analysis. Tissue is then embedded in paraffin, sectioned, and stained for histologic review.

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium DSS

Dextran sulfate sodium (DSS) administered in the drinking water is an established murine inflammatory injury model of acute colitis. This protocol outlines the method for DSS treatment and the preparation of tissues.

Murine Colitis Modeling mit Dextransulfat Sodium (DSS)

Colitis can occur from viral or bacterial infections, ischemic insult, or autoimmune disorders; most notably Ulcerative Colitis and the colonic variant of ...

Biologie

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

Murine Ileocolische Darmresektion mit primärer Anastomose

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of colonic surgeries and can occur in up to 26% of surgical anastomoses, with mortality being up to 39% for patients with such a leak. Currently, there remains a paucity of data detailing the cellular mechanisms of anastomotic healing. Devising preventative strategies and treatment modalities for anastomotic leak could be greatly potentiated by a better understanding of appropriate anastomotic healing.
A murine model is ideal as previous studies have shown that the murine anastomosis is the most clinically similar to the human case as compared with other animal models. We offer an easily reproducible murine model of colonic anastomosis in mice that will allow for further illustration of anastomotic healing.

Anastomotic leak or breakdown after surgery is a major cause of postoperative morbidity and mortality. Our surgery for creating a colonic anastomosis is a reliable and reproducible method for studying the healing mechanisms of anastomoses.

Erstellung von Kolon Anastomose bei Mäusen

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

Murine Appendektomie Modell der chronischen Colitis assoziiert entaktischen Darmkrebs durch präzise Lokalisierung von Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

<meta charset="utf8"></head><body>Mausmodell zur Untersuchung des postoperativen Ileus durch Darmmanipulation

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Postoperatives Ileus-Mausmodell

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

Duodeno-ilealer Bypass mit Sleeve-Gastrektomie-Modell bei Mäusen

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Murine distalen Kolostomie, ein neuartiges Modell Ablenkung Colitis bei C57BL/6 Mäusen

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Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

Die

Murine Colitis Modeling mit Dextransulfat Sodium (DSS)

Murine Ileocolische Darmresektion mit primärer Anastomose

Erstellung von Kolon Anastomose bei Mäusen

Murine Appendektomie Modell der chronischen Colitis assoziiert entaktischen Darmkrebs durch präzise Lokalisierung von Caecal Patch

Postoperatives Ileus-Mausmodell

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