正畸牙齿运动是一个复杂的生物过程，涉及外部力量和软组织和硬组织的改造。为了了解这些过程，在 3D 环境中研究牙齿和牙周组织至关重要。Murine 模型由于其大小、高代谢率和我们拥有的大量遗传信息，是此类研究的一个很好的候选者。
然而，由于小鼠体型小，在小鼠身上产生正畸牙齿运动并不容易。此外，结构分析方法通常涉及分割，这会破坏组织的 3D 结构和上下文。对于 PDL 等非均匀组织而言，保持 3D 结构和上下文至关重要。
为了解决这两个障碍，我们提供了一个协议，以产生小鼠第一个手状摩尔的体质正畸牙齿运动，并描述两种方法，使牙周韧带的3D可视化，而无需分割组织。要将麻醉鼠标定位为矫形器设备插入，请将顶部切口钩入回形器环上。使用电源链固定下切口，并用迷你大肠杆菌小鼠缩放器进一步张开嘴。
在每只眼睛上涂上一小滴盐水，以防止角膜脱水。这些是设备插入中使用的工具。将一根铝线切成一厘米长。
使用显微外科针架，在第一和第二摩尔之间的接触点下方的可亲区域以语言方式从胸针侧滑动导线。将电线从语言侧拉向摩尔的中性侧。将电线的免费端扭曲两到三次以固定。
切一块镍钛或镍线圈弹簧约七到九线长。在下部第一摩尔和切口之间插入线圈，通过线圈的两根线将电线的一个自由端传递，然后紧紧地扭动电线的两端，将线圈固定在摩尔上。使用一对钳子拆下电源链。
将线圈的两到三个线圈循环到切口上，以锚定线圈。在第一个摩尔和切口之间留下三个活动线。将威胁滑动到切口自由金银边缘。
将一层可流动的复合树脂放在线圈的切口边框上，用牙科治疗灯将其固化。固化树脂后更换电源链。修剪摩尔周围的多余电线以避免受伤。
使用相同的固化光，加热 NiTi 线圈 20 秒。这将收紧线圈，完成放置应该看起来像这样。解剖的下皮上的软组织可以用无绒擦拭去除。
在两根手指之间用样品，以圆周运动摩擦外部，直到取出大部分软组织。其余的可以用一把剪刀切断。清洁的可清洗可在右侧显示。
要从微CT扫描将解剖的六溴化物安装在样品室中，将米粒大小的可包装牙科树脂塑造成日志。然后将其放入舞台的示例槽中。将下摆可制于复合材料上。
调整位置，直到第一个摩尔以中线槽为中心，遮挡表面为水平。当对定位感到满意时，可以固化复合材料。这是处于适当位置的可强制的示例。
拿一小团可包装的牙科树脂。它的直径应该在摩尔的宽度附近。将树脂放在第一个摩尔的遮挡表面上。
用水湿润无绒擦拭。将湿巾放在样品阶段的湿度池中。关闭样品室，用螺丝将其贴在微型 CT 上。
现在拍摄 2D 图像，同时垂直降低铁锤，直到铁锤尖端被复合材料包围。安全地关闭 X 射线源，打开微型 CT 腔室，并通过透明玻璃窗固化复合材料。现在样品安装正确，可以根据需要进行成像。
要生成光学清除的半人掌样品，在 150 万个离心管中准备以下解决方案。4%甲醛，50%和70%乙醇在除离子水中。两管100%乙醇和乙基肉桂。
将解剖的半男性化物放在4%的副甲醛中。用铝箔盖住管子，在室温下在柔和的设置上放置在摇杆上六个小时。六小时后，将样品转移到50%乙醇中。
将样品放回摇摇器上，在光线覆盖下放置16小时。重复前一步，用70%乙醇取样16小时，然后每次100%乙醇两次，每次16小时。最后将样品移至乙基肉桂至少12小时。
可靠的正畸运动是由尼蒂线圈装置在穆林曼迪布拉尔第一摩尔生成的。在9周大的雄性小鼠中，平均通经空间在7天后为40微米。相位增强微CT允许 PDL 的可视化。
经过三天的体质正畸运动，PDL密度降低。由于骨表面陨石坑的发展，骨PDL接口更粗糙，这表明骨质疏松活动和骨质吸收。粗糙的表面可以在根的各个层面看到。
这表明运动是转化的，而不是小费运动。在第七天，PDL空间比第三天窄，在解剖根表面的骨PDL边界更平滑，这是骨对抗的迹象，如预期的那样，当正畸牙齿运动发生。由于微CT成像时间长，舞台旋转，样品的安全安装至关重要。
不稳定的样品，导致模糊扫描，其中可以看到冠周围的剪影和PDL纤维看不到。使用乙基肉桂的光学清除提供了另一种方法来查看 PDL，而无需分割。底板可以通过右侧显示的充分清除样本的拉莫斯看到。
这种方法，保留内源性荧光，无需化学固定即可使用。光表显微镜可用于清除样品。通过转基因小鼠，可以观察到荧光血管衬里。
如果骨骼未正确清除，PDL 中的血管将不可见，如面板 F. 本协议描述了如何克服在穆林曼迪布勒摩尔牙齿中产生和分析正畸牙齿运动的两个主要挑战。一旦掌握了正畸牙齿运动技术，可以在15分钟内完成。由于小鼠牙齿的微小尺寸和舌头的存在，这个过程具有挑战性。
然而，我们提供一切必要的解决办法来克服这些挑战。微型 CT 成像需要相位增强功能。我们使用台式微型 CT 演示了我们的技术。但是，任何能够生成相位增强的设置都会产生同步加速器。
ECi 清除结果取决于脱水过程。如果样本不够透明，我们的建议是增加脱水步骤的时间。我们的清除方法也可用于未修复的样品。
透明组织可以在微CT中扫描，因为清除过程不影响组织的矿物质含量。因此，我们的方法为荧光和结构信息提供了一种相关的方法，以生成完整的 3D 分析。
