与神经退化有关的成人 果 蝇的可视化突触变性

协议提供了一个直接的模型，用于以与年龄相关的方式评估突触完整性。因此，我们可以研究组织内的神经退行性疾病，这些疾病既可进行结构分析，也可用于功能分析。这项技术有助于从后脑纵向肌肉神经肌肉结中保存神经元和肌肉组织。

全面调查突触功能随着时间的推移和组织，是很难工作。该方法可应用于神经退行性疾病的研究，包括ALS、帕金森氏症、亨廷顿舞蹈症和阿尔茨海默病。在开始解剖之前，从200微升移液器的尖端切割大约10毫米。

麻醉后，在含有70%乙醇的6厘米培养皿中玩6到10只苍蝇，然后用油漆刷轻轻吸一口。一到两分钟后，使用钳子将一只苍蝇的腿部或翅膀转移到一个硅胶弹性体涂层解剖盘中，该解剖盘中含有7至10毫升PBS，随着苍蝇淹没在PBS中，使用钝的Dumont五号找到钳子小心地取下翅膀，并使用跨度的直边弹簧解剖剪刀，使一个小切口在腹侧角质层去除腿。

一只手拿着解剖剪刀，另一只手拿着钝钳，将苍蝇的腹侧向上放置，用钳子将标本握在位，用剪刀取出头部和腹部。使用 200 微升移液器设置为 40 微升和经过修改的移液器尖端来收集分离的组织样本，将分离的组织样本放入一个贴有适当标签的管中，管内含有 900 微升 PBS 和 150 微升 32%甲醛。在室温下 30 分钟后，使用巴斯德移液器取出固定液，每次洗涤用 1.5 毫升 PBS 冲洗三次。

在开始两节之前，请戴上冷冻防护手套和安全眼镜，用液氮填充旅游瓶。使用刀片断路器以一定角度抓住羽毛刀片，然后弯曲刀片以折断一小块。使用刀片断路器将刀片锁定到位，并使用玻璃巴氏移液器从样品管中清除所有 PBS。

使用低温钳子将管子淹没在液氮瓶中。10 秒后，使用巴斯德移液器将大约 300 微升的冰冷 PBS 添加到冰上每个管中，并将一个可怜的 Axe 腹侧放在包含冰冷 PBS 的 10 厘米硅胶弹性体涂层解剖盘中。使用一双沉闷的钳子来定位胸部并找到一对钳子，去除一些胸腔，以露出胸腔的中线。

使用胸部的中线作为指导，使用戏剧使浅切通过三分之一的胸，并使用钝钳定位胸部在45度角。使用刀片直接切割胸部的中线，以获得两个血带，并仔细做一两个切口，以消除多余的组织，而不会损害背部纵向肌肉。然后将肌肉组织样本放入贴有适当标记的 PBS 管中。

当所有胸部样本被一半分液时，在四摄氏度下将组织渗透在阻塞缓冲液中至少一小时。在孵化结束时，涡流新鲜制备的结构染色溶液，并在每个样品中加入150微升的污渍，在黑暗中的室温下在旋转器上孵育两小时。染色后在PBST中清洗样品，将五个增强标签堆叠成半个15毫米，切在一个玻璃显微镜幻灯片上。

使用经过修改的微移液器尖端将 Thoraces 转移到每张幻灯片上，并使用实验室擦除来去除任何多余的 PBST。使用钳子来排列样本，使托拉斯人朝向肌肉侧朝上。当样品正确定向时，使用 200 微升移液器尖端将 70 微升安装介质应用到每个幻灯片上，并使用盖滑盖住每个幻灯片。

然后使用指甲抛光慷慨地覆盖盖滑的外边缘，以获得每个组织周围的完整密封。评估突触的完整性。神经肌肉结可以染色的马萝卜过氧化物酶和Floe锡电机神经元在焦油结合蛋白43基洛达顿羊肉有很少或没有马萝卜过氧化物酶染色第21天，而野生类型的蛋白质保持不变。

没有观察到肌肉染色的明显差异。除了结构染色的柱体纵向肌肉神经肌肉结标记也可以提供突触完整性的评估与突触前和后突触标记。请注意，液氮闪光冻结有助于成功进行两分，因为非闪光冷冻组织在解剖过程中更容易受到损伤。

按照此过程，可以通过共生显微镜分析保存样本，以测量突触结构的特定方面。