手术小鼠模型中骨关节炎的标准化形态学评价

我们的协议解决了对骨关节炎发育和进展关节变化进行定量分析的坚固且可重复的方法的未满足需求。我们的技术概述了用于骨关节炎多关节组织变化的定量分析的特定和可重复的参数。由于该技术允许骨关节炎的定量分析，因此可用于比较特定治疗对多个关节组织的影响，以评估其疗效。

我们的协议也可以应用于其他骨关节炎模型或肌肉骨骼研究领域，其中软骨和骨骼需要定量。虽然该系统简单直观，但培训仍有必要以重复的方式进行测量，以实现可重复性。来自我们实验室的博士后学者文加德什普拉布·卡鲁帕贡德现在将展示我们的程序。

首先打开显微镜、相机、电脑和触摸屏显示器。选择 4X 目标并单击软件图标以启动软件程序。将幻灯片放在显微镜舞台上，将样品居中测量窗口内，确保测量网格设置为适当的放大倍率，以匹配目标，因为两面体和股骨表面和骨质肉亚骨都包含在感兴趣的图像区域中。

然后在"文件"菜单下，选择"读取设置"。在"设置"窗口中，选择要测量的参数的适当设置文件。要测量总软骨面积，请选择 Tib TC 函数，沿着软骨与关节空间交汇处的软骨表面的上边缘和钙化软骨与亚骨骼交汇处的软骨线沿跟踪。

为了测量钙化软骨面积，请选择 Tib CC 函数，沿着潮汐标记跟踪一条线，这是一条自然存在的线，将软骨钙化和未钙化区域分开，沿着钙化软骨与亚骨骼交汇处的软骨结。要确定未计算的软骨面积，请从总软骨面积中减去钙化软骨面积。要确定软体细胞数，请在组织形态学软件中的设置中创建单独的计数函数，以区分生成矩阵和矩阵非产生软体细胞。

然后使用手写笔在每个软体细胞上制作一个小点，以表示指定的表型，以确定生成或不产生软体细胞的矩阵数。要测量总的三边形关节表面参数，请将一条线穿过三边软骨的表面，以仔细定义各个颤动。然后沿潮汐标记绘制第二条线，作为每个截面平面的内部控制，并除以潮汐标记参数的三边关节表面参数，以计算三边关节表面颤动指数。

要测量亚骨髓空间区域，请选择骨髓区域功能。然后围绕这些区域的参数绘制线条，以确定骨髓空间在骨髓亚骨骼内的总面积。要测量总亚脊椎面积，请选择亚脊骨功能，并勾勒出生长板上级边界中与骨质分界之间横向延伸至骨生前和后骨体区域的区域。

然后从总亚分体区域中减去亚分体骨髓空间面积，计算亚分体骨骼面积。要测量骨质的面积，选择前骨生功能，并追踪近身头骨的前部骨质。然后选择后骨，并追踪近身头骨的后骨。

要测量前股骨突触厚度，请单击前股骨突触，从股骨上前突触的内部插入点绘制一条线，指向半月板上的附着点，从股骨上合成的外侧插入到其附着到半月板的一条线。然后将总突触面积除以突触参数，以计算突触厚度。DMM诱发的骨关节炎导致骨关节炎研究协会国际得分相比，假老鼠增加。

明显的特点是表面侵蚀和软骨丢失。此组形方案可用于检测多个骨关节炎相关变化，包括总软骨和未计算软骨区域的减少。总软体细胞数的减少，重要的是，产生软体细胞的基质数量的损失。

还观察到关节表面的变化，表明侵蚀的严重程度，包括颤动指数的整体增加。骨关节炎还包括亚分骨骼面积的增加和DMM小鼠骨髓空间面积的减少，表明亚分骨质疏松。DMM小鼠的前部和后部骨质体区域也有所增加，这表明正在进行亚骨重塑，作为补偿机制，处理损伤场关节负荷的变化。

对突触的形态分析表明DMM小鼠的突触厚度增加。骨关节炎的典型结果，与突触炎症和炎症细胞因子扩散到关节空间。此外，在骨关节炎研究协会国际评分中，未计算软骨区域的组形计量分析之间没有显著的用户间变异性。

经过组织形态分析，顺序幻灯片和免疫荧光染色可用于检查样品之间蛋白质表达的变化。