通过电形成和微移液器测量其机械性能，对巨型Unilamellar混合囊泡的吸收

该协议有助于使用微管吸气技术可靠地测量合成和真正的聚合物脂囊泡的膜机械性能。这是唯一允许在单个实验中对膜灵活性和不稳定性进行伸长的技术。该协议涉及一系列过程，从囊泡制备到机械评估。

耐心和解决任何技术问题非常重要。这些技术的可视化对于了解如何正确处理毛细管表面以及如何执行强制性预应力步骤至关重要。显示囊泡无缺陷。

演示程序将是马丁·福奎尼翁，一个博士生从实验室工作，研究混合聚合物脂囊体的发展。在开始手术之前，将冷玻璃微管毛细管垂直放入支架中。降低持有人，直到提示浸入新鲜准备的葡萄糖牛血清白蛋白溶液过夜。

到了第二天早上，通过毛细管动作，溶液应该已经上升了大约一厘米。使用 500 微升玻璃注射器，配备柔性熔融石英毛细管，用葡萄糖溶液填充每个移液器。然后从每个移液器中吸出溶液，然后用新鲜葡萄糖溶液多次重新填充移液器，直到去除所有血清。

要准备电热室，首先用适当的有机溶剂清洁 ITO 幻灯片，然后用欧姆表识别导电表面。用胶带将电线连接到每个滑轨的导电侧。将一个毛细管浸入安培溶液中，直到毛细管作用收集了约 5 微升溶液。

将加载的毛细管与一个玻璃 ITO 板的中心接触，然后轻轻地将溶液铺在幻灯片上。当溶剂完全蒸发时，将溶液再次涂抹两次，正如刚刚演示的一样。在沉积区域周围打开的 O 环垫片的两侧添加一层无硅润滑脂之前。

接下来，将第二个 ITO 玻璃板的导电面放在空间器顶部，将电化室放在真空下 3 小时，以去除任何有机溶剂的痕迹。对于巨型单体囊铁的电化，将电线插入发电机。将发电机频率设置为 10 赫兹，将振幅设置为 2 伏特，峰值为峰值。

设置电压后，使用装有0.8毫米内径针头的注射器将一毫升0.1摩尔蔗糖溶液注入腔室，并在施加的电压和频率下将腔室保持75分钟。在电化结束时，关闭发电机。并使用一毫升注射器吸出少量溶液，直到室内产生气泡。

稍微倾斜腔室，将气泡移入腔室，并帮助囊泡从滑动表面分离。将整个溶液体积吸入注射器中。然后，将囊泡溶液转移到一毫升塑料管中。

设置材料进行微管理，吸气形成水流，一罐纯净水，到一个支架上。在提升油箱时轻轻敲击，消除任何气泡，并产生正压。用新鲜的葡萄糖溶液填充血清涂层毛细管，直到尖端形成滴。

从金属支架上取下注射器管，在支架的末尾产生轻微的水流，然后倒置毛细管，将葡萄糖滴连接到水流。然后，将毛细管和支架拧在一起。要定位移液器，请将两个玻璃滑梯与真空润滑脂一起从定制的铝制舞台粘合。

将幻灯片安装到显微镜舞台上。使用一毫升移液器，在两个幻灯片之间形成半月板，其葡萄糖为0.1摩尔葡萄糖。将移液器及其支架放在微操纵器的马达装置上。

拧紧夹紧旋钮，并在粗模式下使用控制面板操纵手柄。降低葡萄糖半月板附近的微移管。使用精细模式将尖端的位置调整到半月板的中心。

将尖端浸入葡萄糖中，清洁其外表面和内表面。几分钟后，从半月板中取走毛细管，用新鲜的半月板代替葡萄糖。在0.1摩尔蔗糖中吸气两个微升的巨型Unilamellar囊泡，吸入20毫升微管尖端。

将囊泡引入半月板。使用显微镜观察滑室底部的囊泡。当囊泡稍微放气时，重新插入吸液器，并聚焦在移液器的尖端。

然后将水箱的基线高度设置为停止粒子运动的压力。用矿物油包围半月板，防止蒸发。要执行微移液器吸气实验，请将移液器尖端降低至半月板。

产生少量的吸力来吸气囊泡。所选囊泡的膜应轻微波动，不应出现任何可见的缺陷。使用微操纵器将移液器提升至较高水平，将吸气囊泡与其他囊泡分离。

将水箱降低至约 10 厘米，以预应力囊泡，然后提高水箱以将压力恢复至初始值。从0.5厘米的高度，慢慢降低吸力，直到达到膜波动的压力。然后增加压力，以清楚地可视化一个舌头在尖端，投影长度几微米。

要确定弯曲模量，请增加吸力压力，一次一微米，以循序渐进的方式。直到达到 0.5 至 0.8 毫纽顿/米。等待五秒钟，并在每一步后拍摄舌头的快照。

确定区域可压缩模量，和解压和应变继续增加吸压从0.5毫纽顿每米，直到破裂张力达到。在这个代表性实验中，POPC的区域可压缩模数和解压菌株与文献中的预期完全一致。在此表中，可以观察到所获取的聚合物体的典型值。

请注意，从二块共聚合物获得的膜的韧性远远大于从三块共聚合物获得的膜的韧性。有趣的是，使用二块共聚一体，有可能获得一个巨大的混合无酰胺脂聚合物囊泡，表现出比脂质体测量更坚固的韧性。该协议可以帮助测量囊泡与移液器，例如，测量膜通过状态冲击的渗透性。

确保以严谨和精确度完成每个步骤，尤其是在设置论坛连接时。通过测量改性囊泡中主要边界的线张力，利用该技术了解膜裂变的物理起源。