该协议为构建和使用气泡柱光生物反应器系统以种植微藻提供了说明，对于任何研究藻类生物燃料、废水处理或藻类生物学的人，都应感兴趣。我们已经找到了尖顶反应堆系统，以产生非常有信誉的结果。反应堆系统也可定制到大量的藻类，成本远远低于许多商业产品。
演示这个程序的将是我实验室的研究生王启辰。要开始设置气泡柱光生物反应器，请从一升玻璃瓶的塑料盖和杂交管中构建一套通风盖，如文本协议所述。将 1/4 英寸 O 环滑过 1/8 英寸面板安装装置的胎面，然后滑入盖中钻出的 1/4 英寸孔中。
将第二个 1/4 英寸滑过螺纹，使盖子夹在两个 O 环之间。然后将锁紧螺母滑到螺纹上，然后拧紧其以将面板安装诱饵固定到位。现在捕捉锁定环暴露在外的男性诱惑，从盖子投影。
对盖子上的每个孔重复此过程。对于将在气泡柱和瓶子反应器上使用的盖子，将 1/8 英寸母诱饵连接到 1 1/2 英寸 1/8 英寸 ID PVC 管。将这些连接到盖子上每个暴露的男性诱饵配件上。
将止回阀连接到 1/8 英寸部件之一的自由端。然后连接一个男性的诱惑到巴布配件的第二块1/8英寸的管道从盖子投射。单击旋转锁环到位，将 0.2 微米空气滤清器固定到位。
空气递送系统、鱼缸、搅拌板和灯光的组装，如文字协议描述。通过使用真空泵去除超藻，集中已结的微藻存量。在每个瓶子中留下少于100毫升的介质，但避免去除已落的藻类。
将藻浆悬浮并转移到无菌的50毫升离心管中。将1000次G离心5分钟，进一步浓缩藻类。在生物安全柜中，去除足够的超高能，为12个光生物反应器实现约80毫升藻类浓缩物的总体积。
避免吸尘颗粒。将藻类浓缩物转移到消毒容器中。现在，在每个光生物反应器中加入六毫升藻浆，并加入一个10毫升血清学移液器。
旋转生物反应器，将藻类混合到介质中。使用血清移液器从每个生物反应器中抽出两毫升样品，并转移到两毫升管中。每 24 小时收集两毫升样品，以监测培养进度。
使用测试条检查样品 ph，并根据需要调整反应器。拧紧生物反应器盖，将所有生物反应器放入鱼缸水浴中。将气化、二氧化碳和照明调整到适合物种的水平。
采样后每天旋转生物反应器位置。将每个培养样品的 200 微升在三孔中，用于 96 孔微孔板的孔。然后在550纳米和680纳米时测量光学密度。
用一个研究生圆柱器测量每个生物反应器的固定量藻类培养量，并在离心瓶中转移。将培养培养 4，696 次 G 离心五分钟。小心地吸出超吸器，将其丢弃。
将颗粒转移到标有 50 毫升的管中。用蒸馏水冲洗离心瓶，然后将内装物转移到50毫升管中。确保总体积不超过 45 毫升。
如文本协议所述，清洗藻类颗粒后，丢弃超微。然后，将7.5毫升蒸馏水加入每50毫升管中。现在，涡流50毫升管，并转移藻浆到预重15毫升管。
用额外的蒸馏水冲洗50毫升管，将液体转移到15毫升管中，使这些管子中的总体积控制在12毫升以下。离心15毫升管并像之前一样丢弃超高管后，在零下80摄氏度下用颗粒冷冻管至少30分钟，准备冷冻干燥。在每含有20毫克冷冻干藻的两毫升管中加入1.5毫升的福尔奇溶剂。
将大约0.5毫升的氧化硅珠倒入每个管中，直到液位达到2毫升。在珠磨机中，以6.5米/秒的速度将藻类样品均匀化20秒。将管子转移到冰上30秒冷却样品。
然后，再重复五次，以完全提取脂质。通过含有不锈钢丝网盘的五毫升注射器过滤均质，将珠子应变，在 15 毫升管中收集滤盐。用1.5毫升的耳蜗溶剂清洗珠子，必要时用西环将液体推穿。
重复此洗涤 2 次，并收集 15 毫升管中的所有滤液，产生约 6 毫升的最终体积。将1.2毫升0.9%氯化钠溶液加入15毫升管中的福尔奇提取物中，并加入涡流以混合。将15毫升管以6000倍G离心5分钟。
使用 15 毫升管侧的线记录底部氯仿相容量到最接近的 0.1 毫升。然后使用玻璃牧场移液器将底部相转移到玻璃邪恶。要进行中性脂质测定，用甲醇稀释脂质提取物和植物油标准三倍。
对于每稀释，样品添加80微升到96孔聚丙烯微孔板四甲酸酯。对于溶剂空白，在四甲酸酯中应用80微升的福尔奇溶剂。对于标准，添加10、30、60、90和120微升稀释植物油标准也四分之一。
将微孔板放在烟气罩中，在 55 摄氏度的预热干块加热器上，20 至 30 分钟，直到所有溶剂蒸发。从加热块上取下微孔板，让它冷却到室温。然后，将30微升异丙醇添加到每个井中，然后通过上下移液混合。
确保所有移液器通道混合溶液并重新产生脂质，从而产生均匀的绿色液体。现在，每毫升加入200微升，每毫升1微克，每井有一个尼罗河红色溶液，然后上下管10次混合。在室温下孵育5分钟后，在每井中加入20微升50%漂白剂溶液，并上下管5次，以混合良好。
在室温下，让板孵育30分钟。30分钟后，在530纳米的激发下，每5至10分钟读取一次样品中的荧光，575纳米发射，自动切断设置为570纳米，直到藻类样本的信号稳定下来。此过程可生成 OD 550 纳米的 algel 光学密度数据的时间过程。
控制培养在新鲜的 NH4 介质上生长。治疗之一，是共同培养辅助球菌原糖二化物和在新鲜与生俱来的NH4培养基上生长的亚佐斯皮里鲁姆胸罩。治疗二，是一种在先天NH4介质上生长的azinic A.原型二化物，每毫升50毫克的AA，完全抑制藻类生长。
治疗三，是阿齐尼奇 A.原型二，生长在从巴西利安花花的花介质上。生长曲线显示辅助球菌原二化物在120小时进入晚期对数生长。此处显示的是 550 纳米的光学密度与最终干重浓度之间的核心曲线，使用第二阶多项式拟合。
最后，可将着色应用于时间过程光学密度数据，获得干重生长曲线。这里也使用相同的治疗方法，只不过小球菌是培养的，而不是辅助球菌原糖二氧化硅。中性脂质测定中获得的干重中性脂质与相应薄层色谱板上的三糖醇含量相关。
与A.原型二剂不同，IAA治疗没有抑制C.Sorkiniana的生长。在提取藻类脂质后，可以分析剩余的细胞托盘的淀粉和细胞壁含量，从而提供细胞内储能产品的详细图片。这里介绍的方法使阿尔格尔生物燃料和废水处理领域的新发现得以实现。
具体来说，这个系统被用来更好地了解细菌如何影响凝胶的生长。
