小鼠原代多元体的体外模拟？

此方法有助于解决神经生物学中的关键问题，如运动神经元极性、轴向、轴翁贩运和神经退行机制。这种技术的主要优点是获得高度丰富的运动神经元培养，同时我们采取表达我们的击倒蛋白质分钟的感情。要开始这个程序，把一个胚胎放在用硅编码的解剖培养皿中。

在显微镜下，用钳子将胚胎用腹部对着硅。使用第二对钳子，将其中一个尖端插入罗斯特拉德脊髓的中央运河中。然后，关闭钳子以稍微撕裂后体组织。

对康奈尔侧重复此操作，直到打开整个脊髓。接下来，定位胚胎，使开放的脊髓对硅。随后，将脊髓的 rostrad 部分从身体中分离出来。

捏住脊髓的 rostrad 部分，然后用头部拉胚胎提取脊髓。小心地拉开仍然附着在脊髓上的任何剩余的脑膜和 DRG。扁平的脊髓在硅上，并使用手术刀，通过沿着每一侧的中间切割去除脊髓的后半。

将中间部分切成十块，然后转移到一个新的管子上。要准备脊髓细胞悬浮液，请收集管底的脊髓碎片。用一毫升的火腿 F-10 介质代替 HBSS，并添加 10 微升的三辛。

在37摄氏度下孵育管子10分钟。为了停止酶消化，将片段转移到一个新的15毫升管，包含800微升的完整L-15介质，100微升4%BSA，和100微升的DNA和滴定，两次。让碎片沉淀两分钟，然后收集在新鲜15毫升管的上清液。

轻轻在上清液管底部加入两毫升 4%BSA。中心在 470 x 重力下熔断 5 分钟。5 分钟后，取出上流液，用 2 毫升完整的 L-15 介质重新悬挂细胞托盘。

对于莫托尼龙富集，将细胞悬浮液分成两个15毫升管。然后，向每个管中加入两毫升L-15 PH介质。如果从六个胚胎开始，使用相当于三个胚胎每个管，和三毫升的中等。

慢慢添加2毫升的密度梯度溶液，到每个管的底部获得一个尖锐的界面。接下来，在室温下，在 830 x 重力下将中导熔断 15 分钟。在此步骤之后，小细胞应位于管的底部，而大细胞（如莫托龙）应位于密度梯度溶液/介质界面。

在接口的细胞中，Asperae 1 至 2 毫升，并将它们转移到新鲜的 15 毫升管中。使用 L-15 PH 介质将音量调整为 10 毫升。随后，在两管底部加入两毫升的4%BSA缓冲。

在室温下，在 470 x 重力下进行 5 分钟的中心保险丝。5 分钟后，拆下上经剂，重新悬挂托盘和 3 毫升完整的 L-15 介质。在室温下以 470 x 重力重复离心器 5 分钟。

然后，取出上流液，重新悬挂细胞托盘和两毫升的完整培养介质。培养运动神经元，在24个井板中每井500微升培养基中稀释至5000-10000个细胞。然后，在 P-1，000 移液器尖端拆下层溶液。

立即转移在培养介质中稀释的运动神经元。编码板，以避免干燥。为了准备DNA，在50微升神经元培养培养的细胞中重新悬浮1微克的DNA。

和漩涡5秒。要准备B管，在50微升神经元培养基中重新悬浮1.5微升珠。在50微升DNA溶液中加入50微升珠溶液，在室温下孵育20分钟。

在孵育过程中，从将转染的井中提取100微升的培养介质。随后，将100微升的DNA珠混合物转移到每一个井。并在37摄氏度的磁板上孵育24个井板，20-30分钟。

这里展示的是现代神经元形态，在培养四天后，内源性非磷酸化神经丝重链的站立所揭示出来。在这些图像中，显示体外四天后的调制解调器神经元形态，并在第二天通过磁体分泌转染为EGFP转基因。座右铭神经元被标记SMI-32或泛神经标记TUJ-1反染色，箭头指示神经元的母细胞。

这些是磁感染运动神经元的共合图像，表达野生类型或突变EGFP NEFH构造，并染色为他们的自噬标记LC-3B。箭头显示突变EGFP NEFH蛋白聚合体，也是LC-3B阳性后，蒙托安达库查可以通过视频显微镜分析，以可视化轴子贩运，并添加一些指导。在最初开发解决神经生物学的基本问题后，该技术也被证明是一个强大的工具，探索生理病理机制，涉及莫托龙疾病的光谱，如毒性休克综合征疾病，萨缪尔萎缩性侧索硬化症，或脊柱肌肉萎缩。