الصفائح الدموية المشتقة من وظائف الحويكل خارج الخلية من يزرع تي

تركيب الحويصلات خارج الخلية مع المواد الحيوية هو نهج مرغوب فيه لدراسات الطب التجديدي. وهكذا، فإن هذه الدراسة تقارير وظيفية التيتانيوم مع المركبات الكهربائية كأداة عملية لجراحة العظام وتجديد العظام. انخفاض الصب الوظيفي هو وسيلة سهلة ومنخفضة التكلفة بالمقارنة مع استراتيجيات أخرى مثل الفخ البوليمري أو الربط الكيميائي الحيوي.

بدء التشغيل الوظيفي سطح التيتانيوم عن طريق غسل أقراص التيتانيوم مع الماء deionized في كوب زجاجي. ثم تجاهل الماء قبل غسل الأقراص مع 70٪ الإيثانول. Decant الحل ل sonicate يزرع غسلها في 50 C لمدة خمس دقائق في الماء deionized.

بعد التخلص من الماء يحتضن التيتانيوم يزرع في محلول هيدروكسيد الصوديوم 40٪ في 50 C لمدة 10 دقائق مع التحريض ومن ثم sonicate يزرع في الماء deionized كما هو موضح. بعد ذلك ، قم بإجراء ما لا يقل عن خمس غسلات من الغرسات بالماء المتأين. حتى درجة الحموضة محايدة على مؤشر درجة الحموضة.

كرر عملية sonication والحضانة ، كما هو موضح سابقا ، عن طريق استبدال هيدروكسيد الصوديوم بحمض النيتريك بنسبة 50٪. إجراء يغسل وسونيكيشن مع الماء deionized قبل تخزين يزرع في محلول الإيثانول 70٪. احتضان يزرع التيتانيوم في محلول حمض النيتريك 30٪ لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع التحريض لطيف.

بعد الحضانة إجراء ما لا يقل عن خمسة يغسل مع الماء deionized حتى درجة الحموضة محايدة على مؤشرات درجة الحموضة. ثم احتضان يزرع التيتانيوم بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة في الماء deionized. في اليوم التالي، تجف يزرع تحت فراغ في 40 C لمدة 10 دقائق.

العمل تحت خزانة ثقافة الخلية، وضع يزرع التيتانيوم في لوحة 96 جيدا مع الجانب الجهاز تواجه. ترتيب لeVs vesicles خارج الخلية إسقاط الصب عن طريق ذوبان حل المركبات الكهربائية، والحل دوامة في نبضة من ثلاث ثوان. بعد الخلط، قم بإيداع 40 ميكرولتر من محلول المركبات الكهربائية على سطح التيتانيوم لشل حركة 4 × 10^11 سيارة EVs كحد أقصى لكل غرسة، وفقا للتركيز الذي يحدده تحليل تتبع الجسيمات النانوية.

بعد ذلك، ضع اللوحات تحت ظروف الفراغ في 37 C لمدة ساعتين تقريبا أو حتى تصبح القطرات جافة تماما. ضبط وقت التجفيف اعتمادا على عدد من يزرع التيتانيوم والمياه الموجودة في غرفة فراغ. تم قياس كمية المركبات الكهربائية الصادرة من أقراص التيتانيوم من خلال تحليل تتبع الجسيمات النانوية.

في اليوم الثاني، تم إصدار حوالي 10^9 مركبات كهربائية، أعقبها إصدار مستمر في الأيام 6 و10 و14. تم تقييم التوافق البيولوجي في الخلايا المختبرية للمركبات الكهربائية التيتانيوم مع ديهيدروجيناز اللاكتات، أو اختبار إطلاق LDH، في 48 ساعة بعد بذر الخلية على يزرع. أظهرت مركبات التيتانيوم EVs كمية أقل من LDH من الحد الأقصى للقيمة السامة للخلايا المقبولة.

في حين أن مجموعة التحكم التيتانيوم، عرض مستويات أعلى نشاط LDH. الخطوة الأكثر أهمية هي تجفيف فراغ الغرسة المغلفة. من المهم التأكد من أن جميع المياه تتبخر للحصول على physisorption الأمثل.