القيمة الفريدة لهذا البروتوكول هي أن اثنين من الموظفين الذين يستخدمون معدات متاحة بسهولة في مساحات المختبر الصغيرة يمكنهم إنتاج ما يكفي من البعوض المعقم لدعم برنامج SIT التشغيلي الذي تبلغ مساحته 50 فدانا. إن كفاءة هذه التقنية وتكلفتها المنخفضة يجعلانها سهلة المنال ومستعصية حتى بالنسبة لمناطق مكافحة البعوض الصغيرة لزيادة برنامجها المتكامل لمكافحة النواقل. سيوضح الإجراء أنا وباربرا باير ، فنيي مختبرات العلوم البيولوجية من وحدة الأبحاث.
لتربية Aedes aegypti البالغة من الشرانق ، قم بإعداد أقفاص تربية من الألومنيوم قابلة للطي مقاس 60 × 60 سم مع غربلة شبكية من الألياف الزجاجية بحجم ثقب 0.84 × 0.84 ملم ، وكم مخزون يمكن الوصول إليه على جدار عمودي واحد لكل قفص. ضع كوبا بلاستيكيا سعة 1،900 ملليلتر مع عذارى الزاعجة المصرية بنسبة جنس واحد إلى واحد في كل قفص تربية واربط الكم مغلقا ، واترك الأكواب في أقفاص للإغلاق لمدة أربعة أيام تقريبا عند 28 إلى 30 درجة مئوية أكبر من 50٪ رطوبة نسبية في دورة 12:12 أو 14:10 ضوء: مظلمة حتى لا يظهر المزيد من البالغين. بعد 24 ساعة من وضع الشرانق في أقفاص التربية ، ضع وعاءا يحتوي على محلول سكروز بنسبة 10٪ مع فتيل إسفنجي في كل قفص وقم بتعليق إسفنجة 10 × 2 سم منقوعة في العسل من خطاف سلكي لتوفير الترطيب والتغذية على التوالي للبعوض البالغ.
بعد 48 إلى 72 ساعة من ظهور معظم البالغين كل يومين إلى ثلاثة أيام خلال الأسابيع الثلاثة إلى الأربعة التالية بعد ذلك ، املأ الواقي الذكري من جلد الخروف ب 50 إلى 100 ملليلتر من دم البقر المنقص لكل قفص ، وقم بتدفئة الواقي الذكري إلى حوالي 37 درجة مئوية في حمام الماء الساخن. بعد التربيت بعناية على الواقي الذكري بالمنشفة ، ضع الواقي الذكري المجفف جزئيا في أطباق بتري مبطنة بالورق داخل الأقفاص لمدة 30 إلى 60 دقيقة. بعد 48 إلى 72 ساعة من كل تغذية دموية ، ضع كوبا من وضع البيض سعة 1،900 ملليلتر يحتوي على 800 مل من ماء العذراء المصفى ومزود بورقة من 8 إلى 10 × 30 سم من ورق إنبات البذور المجهز على طول المحيط الداخلي للكوب في كل قفص.
لتربية يرقات Aedes aegypti من البيض ، استخدم ورقة وضع البيض مع 5،000 إلى 10،000 بيضة موجودة وقطع مقطع من ثلاثة إلى سبعة سنتيمترات عموديا على خط وضع البيض. ضع القطعة في وعاء جديد سعة 460 ملليلتر نصف مملوء بماء الصنبور ورشة من رقائق طعام السمك المسحوق. قم بتغطية الحاوية وتحريكها بقوة لمدة دقيقة واحدة على الأقل قبل صب المحتويات بالكامل في مقلاة لتربية اليرقات تحتوي على ثلاثة لترات من ماء الصنبور و 50 ملليلتر من الملاط البني.
ضع علامة على المقلاة بتاريخ البدء ومعلومات السلالة وجدول التغذية. بمجرد الوصول إلى نسبة العتبة التقريبية لليرقات في أحواض اليرقات ، صب محتويات كل مقلاة من خلال غربال بحجم 20 إلى 40 واستخدم زجاجة ضغط من ماء الصنبور لغسل الشرانق واليرقات من الغربال إلى دورق بلاستيكي متدرج سعة ثلاثة لترات. لفصل الشرانق الذكور عن اليرقات والشرانق الأنثوية ، قسم محتويات كل كأس زجاجية بين حاويات بلاستيكية متعددة سعة 1.9 لتر وضع حاوية تجميع ضحلة صلبة سعة أربعة لترات أسفل السد عند قاعدة فاصل العذراء.
املأ كأسين بلاستيكيتين مدرجتين سعة ثلاثة لترات بحوالي ثلاثة أرباع مملوءة بماء الصنبور واسكب الماء عبر الفراغ بين الألواح الزجاجية للفاصل أثناء ضبط المقابض العلوية والسفلية للسماح للماء بالتدفق باستمرار عبر الفاصل. بمجرد تجمع المياه الراكدة بالتساوي على ارتفاع 1.25 سم تقريبا من قاعدة الألواح ، حدد مواضع البداية عند المقابض السفلية للفاصل بشريط لاصق ، وابدأ في صب حاويات الشرانق واليرقات في الفاصل مع تدوير المقابض السفلية باستمرار بطريقة عكس اتجاه عقارب الساعة من سنتيمتر إلى سنتيمترين من مواضع البداية. عندما تغسل معظم اليرقات أو جميعها عبر السد إلى حاوية التجميع ، أوقف تدفق المياه مؤقتا واستخدم غربالا رقم 30 لتنظيف حاوية تجميع اليرقات.
عندما تتم إزالة جميع اليرقات ، صب الماء واضبط المقابض مرة أخرى للسماح بتدفق الشرانق الذكور في حاوية التجميع. ثم صب الشرانق الذكور من الحاوية في غربال رقم 20 واستخدم زجاجة ضغط لتر واحد من ماء الصنبور لغسل الشرانق من الغربال في حاوية منفصلة سعة 1.9 لتر. عندما يتم جمع كل الشرانق الذكور ، صب الماء واضبط المقابض للسماح بجمع الشرانق الأنثوية.
استخدام الغربال رقم 20 لنقل الشرانق الأنثوية إلى حاوية جديدة سعة 1.9 لتر كما هو موضح للتو. ثم صب الماء واضبط المقابض مرة أخرى حتى يتم طرد جميع البعوض غير الناضج من الفاصل. صفي الشرانق الذكور المجمعة بغربال واغسل البراز في دورق متدرج سعة لتر واحد بأقل قدر ممكن من الماء.
صب الشرانق بعناية في أطباق بتري مبطنة بورق ترشيح رطب في طبقة واحدة. قم بإزالة الماء الراكد من قاع طبق بتري باستخدام ماصة مرعى طازجة سعة ثلاثة ملليلتر لمنع حركة العذراء أثناء العمل. قم بتجميع أطباق وأكوام بتري قبل إغلاقها داخل كيس قابل لإعادة الإغلاق سعة 3.8 لتر ليناسب غرفة التشعيع.
لتحديد الدفعات الكمية من ذكور البعوض البالغة المشععة ، قم بإزالة أي مصادر تغذية من قفص التربية ووضع قفصا واحدا في غرفة كبيرة لثاني أكسيد الكربون لمدة خمس إلى سبع دقائق ، مما يؤدي إلى طرق جوانب الحاوية لإزاحة أي بعوض يتشبث بالجدران. في نهاية فترة التعرض ، انقل البعوض إلى قنينة شفاط وقم بتخدير البعوض مرة أخرى قبل هز البعوض في سطح عمل مغطى بورق أبيض. قم بشفط جميع الذكور بعناية من سطح العمل إلى قنينة جديدة وكرر التعرض والجمع حتى يتم جمع جميع الذكور البالغين من جميع أقفاص التربية.
في مرحلة ما أثناء عملية فرز الجنس ، قم بإنشاء قارورة تحتوي على 25 بعوضة ذكر بالغ فقط. عندما يتم جمع جميع الذكور ، قم بوزن كل حقير من البعوض في قارب وزن قطراني على ميزان ، واسكب البعوض المسحوق بسرعة في حاوية بطاقات سعة 240 ملليلتر تحتوي على 50 ملليغرام صبغة وسم. قم بإمالة الحاوية وتدويرها مرة واحدة كاملة في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة حتى يتم تغطية جميع البعوض برفق وصب البعوض في قارب وزن جديد ، ثم قم بطي قارب الوزن إلى النصف للسماح بتوجيه البعوض عبر غلاف المخزون إلى حاوية الإطلاق.
عندما تتم إضافة ما يقرب من جرامين من ذكور البعوض إلى حاوية الإطلاق ، قم بربط غلاف المخزون مغلقا ووضع علامة على شريط الملصقات على إطار حاوية الإطلاق بلون الصبغة ورقم الحاوية والوزن الإجمالي للبعوض. في هذه التجربة التمثيلية لتربية البعوض والإشعاع والتسويق من الذكور Aedes aegypti ، تم جمع جرامين من ذكور البعوض البالغ من ثلاثة أقفاص تربية جنبا إلى جنب مع قارورتين من 25 ذكرا من قفصين للسماح بحساب متوسط الوزن لكل بعوضة. تم التخلص من 25 أنثى في المجموع من اثنتين من الدفعات.
وتعد التغذية في الوقت المناسب والقائمة على الملاحظة خلال أسبوع تربية اليرقات أمرا بالغ الأهمية لتوليد الشرانق المتطورة جيدا للفصل. هذا يولد تمييزا واضحا بين الذكور والإناث مما يؤدي إلى انخفاض حدوث الإناث في خطوات الوسم. إلى جانب استخدامها في برامج تقنية الحشرة العقيمة التشغيلية ، يمكن أيضا استخدام هذه الذكور العقيمة على نطاق واسع في التجارب التي تبحث في منافسة التزاوج ، والبقاء على قيد الحياة ، وتشتت الأشعة مقارنة بالذكور البرية غير المشععة.
يسمح لنا تعديل التقنية لتشمل إناث البعوض بالتحقيق في تأثير الإطلاق غير المقصود للإناث المشععة فيما يتعلق بالخصوبة وكفاءة النواقل.
