على المدى الطويل اللدونة متشابك, على وجه التحديد, وقد تم التحقيق على المدى الطويل التقوية والاكتئاب على المدى الطويل على نطاق واسع على طول التوجه عرضية من قرن آمون. وقد تم النظر في ذلك أيضا على طول الاتجاه الطولي. ومع ذلك، عندما يتعلق الأمر بالتوجه الطولي، تم إيلاء اهتمام ضئيل جدا لمحور CA1 الطولي من قرن آمون فيما يتعلق اللدونة متشابك.
وقد أظهرت نشرة سابقة من مختبرنا أن الخلايا العصبية الهرمية CA1 من شكل قرن آمون اتصالات الجمعيات التي يمكن أن تدعم اللدونة متشابك. لمزيد من فهم هذا البروتوكول، من المستحسن الرجوع إلى المنشور السابق مع الإشارة إليها أدناه. حقن يوريتان ل التخدير الماوس.
ضع الماوس المُخنَد بالكامل على لوحة تدفئة تُضبط على 37 درجة مئوية. تطبيق جل العين لترطيب العينين. إصلاح الجمجمة من الفأرة بحزم باستخدام المشبك العين.
المشابك العين يعطي حرية التنقل للمجرب أثناء العمليات الجراحية. ويمكن أن تكون مفيدة بشكل خاص للتجارب التي تنطوي على القشرة السمعية، وكذلك. ومع ذلك، يجب توخي الحذر للحصول على إحداثيات stereotaxic الدقيق.
فصل الأنسجة تحت الجلد والعضلات في نهاية عظم الماوس بين الزري والعظم القذالي مع المشرط. لطخة المادة الجافة الجافة مع مسحة القطن. ثم تقوم بثقب الماجنا سيستيرنا لتصريف السائل النخاعي.
نعلق مسحة القطن للحفاظ على استنزاف السائل النخاعي. قطع وإزالة الجلد على فروة الرأس والحفاظ على المنطقة المكشوفة الجافة. وضع علامة على النقاط المقابلة لمنطقة فرس النهر باستخدام مساعدة من الفرجار veniyar.
إجراء شق في الجمجمة فوق المنطقة الظهرية من قرن آمون على طول النقاط ملحوظ باستخدام مشرط أو عالية السرعة الحفر أثناء مراقبة تحت المجهر. الحفاظ على أنسجة المخ المكشوفة رطبة عن طريق تطبيق المالحة الفسيولوجية أو النفط الخامل. إصلاح ووضع التحفيز وتسجيل الأقطاب بحزم في حامل ستيريو.
ضبط التحفيز وتسجيل الأقطاب الكهربائية فوق CA1 الحصين الظهري. استخدام الدماغ الماوس في تنسيق stereotaxic كدليل في تحديد مكان الاحداثي لمنطقة فرس النهر الظهرية الطولية CA1. بالنسبة للتسجيلات باستخدام أقطاب كهربائية متعددة القنوات، حدد أولاً الإحداثيات المجسّرة لمنطقة فرس النهر CA1 باستخدام القناة الأولى.
ضع الأقطاب الكهربائية المتبقية بحيث تكون زاوية التحفيز وتسجيل الأقطاب الكهربائية في نطاق 30 درجة إلى 60 درجة بالنسبة لخط الوسط من نقطة البريغما. هذه الزاوية تتوافق مع الاتجاه الطولي لمنطقة فرس النهر CA1. قم بتشغيل نظام التسجيل.
فتح البرنامج العصبي للتسجيل والبيانات. خفض أقطاب التسجيل والتحفيز ببطء باستخدام ميكرومانيبولاتور حتى اللمسات فقط على سطح الدماغ. لاحظ زيادة في المعاوقة فقط عندما يلمس القطب سطح الدماغ.
ويمكن ملاحظة ذلك في القناة الحمراء التي تظهر على الشاشة. خفض ببطء الأقطاب الكهربائية إلى عمق تقريبي المقابلة لإحداثيات ستيريو المختارة لحصان CA1. إعطاء التحفيز سمسم استحضار مستحضر معبأة مستقرة ويلاحظ احتمال ما بعد متشابك.
تنفيذ منحنى الإدخال والمخرجات للكشف عن أقصى كثافة التحفيز. استخدم منحنى المدخلات والمخرجات لتعيين كثافة خط الأساس وتعيين شدة التحفيز لإثارة تحفيز التردد العالي أو التحفيز منخفض التردد. سجل الإمكانات المحلية الكاملة لمدة ساعة بعد التحفيز العالي التردد أو التحفيز منخفض التردد.
تصدير البيانات وتحليل باستخدام البرمجيات المفضلة. الفقراء 400 مل من محلول التقطيع المعد بالفعل في قارورة منفصلة وأكسجين لمدة 20 دقيقة تقريبًا. الفقراء 200 مل من محلول تقطيع الأوكسجين.
تغطية في فيلم para ونقلها إلى ثلاجة 80 درجة لمدة 20 دقيقة تقريبا لجعل طين. الفقراء المتبقية 200 مل من حل تشريح في شريحة الدماغ عقد الغرفة والحفاظ في بوت الماء من 32 درجة مئوية مع محتدما المستمر. أخرج محلول تقطيع مبرد والفقراء ما يقرب من 50 مل في منقار.
قطع رأس الماوس تخدير. قطع الجلد التي تغطي الجمجمة من الماوس وقطع قطعة الجمجمة على طول خط الوسط إلى عظم القذالي. افتح الجمجمة مع ملقط حادة.
استخرج الدماغ بلطف مع ملعقة ووضعها في محلول التقطيع المبرد في القارص. فصل نصفي الدماغ على طول خط الوسط مع شفرة مشرط. عزل قرن آمون عن طريق فصل بلطف من القشرة مع ملعقة.
قطع الحاجز والنهاية الزمنية من الحصين المعزول. تطبيق كمية صغيرة من الغراء على لوحة التقطيع. لشريحة فرس النهر CA1 الطولية، إرفاق منطقة CA3 من قرن آمون إلى لوحة تشريح مع الغراء.
لشريحة عرضية، والتي سوف تكون بمثابة السيطرة، إرفاق الطرف البطني من قرن آمون إلى لوحة تشريح من هزاز. ضعه في غرفة التقطيع تعيين المعلمات هزومي.
شريحة قرن آمون المرفقة مع اهتزاز. وهناك شريحة الدماغ فرس النهر CA1 طولي جيدة سيكون لها طبقة واحدة من CA1، وطبقتين من gyrus دنتات. أيضا، سوف تكون موجودة في الطبقة أوريين وشعاعية الطبقة من المنطقة CA1.
بدلا من ذلك، شريحة الدماغ فرس النهر عرضية سيكون لها دنت جيروز CA3 وCA1 المناطق في لباقة. نقل شرائح الدماغ إلى شريحة الدماغ عقد الغرفة في بوت الماء. احتضان لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة 32 درجة مئوية وجلب إلى درجة حرارة الغرفة للانتعاش.
بشكل مستمر superfuse ACS serf في غرفة التسجيل بسرعة 2 مل في الدقيقة الواحدة. نقل شريحة الدماغ في غرفة التسجيل، وضبط موقف شريحة الدماغ مع ملقط حادة وعقد في مكان مع هاب. قم بتشغيل البرنامج للحصول على البيانات.
شريحة الدماغ الطولية. بالنسبة للشرائح الطولية، ضع قطب التحفيز والتسجيل في الطبقة الأوريان. ضع قطب التحفيز على الجانب الحاجز أو الصدغي لشريحة الدماغ مع التسجيل من نفس الطبقة.
بدلا من ذلك، وضع التحفيز وتسجيل القطب في شعاع الطبقة، ووضع القطب التحفيز في أي من الحاجز أو الجانب الصدغي لشريحة الدماغ. بالنسبة لشرائح عرضية كتحكم، ضع قطب التحفيز على منطقة مسار CA3 Schaffer الجانبية، وكهربية التسجيل على منطقة CA1. بدوره على مولد التحفيز العزل وإعطاء التحفيز.
ضبط عمق قطب تسجيل سمسم استحضار مستقر مثير بعد متشابك التعبئة ويلاحظ المحتملة. تنفيذ منحنى الإدخال والمخرجات للكشف عن أقصى كثافة التحفيز. استخدم منحنى المدخلات والمخرجات لتعيين كثافة التحفيز للتسجيل الأساسي الذي يثير تحفيز التردد العالي أو التحفيز منخفض التردد.
الرجوع إلى قوات الدفاع الشعبي المرفقة للمعايير في تحفيز التقوية على المدى الوحيد أو الاكتئاب على المدى الطويل. أثار إثارة المحتملة بعد متشابك زيادة استجابة لتحفيز التردد العالي في الجسم الحي. وهذا يدل على أن فرس النهر الطولي CA1 يدعم التقوية على المدى الطويل.
بالنسبة لشرائح الدماغ CA1 قرن آمر الطولي، لوحظ زيادة في الاستجابة لتحفيز التردد العالي في كل من الحاجز والجانب الزمني من الطبقة أوريان و رادياتوم. وهذا يدل على أن اللدونة متشابك الناجمة على طول منطقة CA1 فرس النهر الطولي ليست خطية أو اتجاه محدد. باستخدام بروتوكولات وضعت بالفعل للاكتئاب على المدى الطويل، لم يكن سبب الاكتئاب على المدى الطويل في كل من الجسم الحي وفي المختبر.
وكخلاصة، لقد أظهرنا لك كيفية التحقيق في اللدونة متشابك على المدى الطويل في منطقة فرس النهر CA1 الطولي في كل من الجسم الحي وفي المختبر. ويمكن الاطلاع على مزيد من التفاصيل عن البروتوكول في قوات الدفاع الشعبي المصاحبة لهذا الفيديو لمساعدتك في التحقيق في اللدونة متشابك طويل الأجل على طول منطقة CA1 قرن آمون الطولي في مختبراتك الخاصة.
