يمكن استخدام تقنية العزل هذه لاستكشاف ما إذا كانت الخلايا الجذعية الدهنية يمكن أن تساعد المرضى على تجديد وظيفة الانتصاب بعد استئصال البروستاتا الجذري. هذه الطريقة لا تقتصر على مرض معين. يمكن استخدامه في جميع مجالات أبحاث الخلايا الجذعية الدهنية.
تستخدم الخلايا الجذعية المعزولة لعلاج ضعف الانتصاب، ولكن تقنية العزل هي إجراء عام ويمكن أن تكون الخلايا الجذعية مفيدة في مجالات أخرى ضمن أبحاث الخلايا الجذعية. ابدأ بتطهير جلد البطن وكيس الصفن بنسبة 0.5٪ من الكلورهيكسيدين. استخدم علامة جراحية لرسم المناطق الموجودة على البطن حيث سيتم إجراء شفط الدهون ، وعادة ما تكون المنطقة الواقعة بين التوليف والسرة.
قم بعمل شقين بعرض ستة ملليمترات في جلد البطن باستخدام مشرط رقم 11. ضع الشقوق بشكل متماثل وجانبي من المنطقة المسحوبة لأعلى من شفط الدهون. ضع القليل من مواد التشحيم على الشقوق للتأكد من أن قنية التسلل تنزلق داخل وخارج الشقوق بسهولة أثناء شفط الدهون.
ثم أدخل قنية تسلل بحجم 14 مقياسا من خلال الشقوق في الجلد. حقن محلول كلاين المعدل تحت الجلد في المناطق المحددة الموازية لسطح الجلد حتى يصبح النسيج المستهدف منتفخا وثابتا أو منتفخا. حقن حجم من محلول كلاين المعدل بنسبة واحد إلى واحد إلى واحد إلى الأنسجة الدهنية.
انتظر لمدة 10 دقائق لزيادة آثار الأدرينالين إلى أقصى حد ، وتقليل كمية الدم في الأنسجة الدهنية التي يتم حصادها. قم بإجراء شفط الدهون بالتسريب النفاث القياسي لحصاد 200 إلى 300 ملم من الأنسجة الدهنية. استخدم القنية الحادة المجوفة مع أنبوب ضخ وفوهة مدمجين.
قم بتوصيل القنية بجهاز شفط لشفط الدهون. أدخل حقنة بثلاثة ملليمترات مع طرف حاد من خلال الشقوق الموجودة على البطن وجمع الأنسجة الدهنية في Lipo Collector للحفاظ على الشحم الشحمي في بيئة معقمة. سيبدأ الشحم الشحمي في الانفصال عن مرحلة الماء.
استخدم محاقن معقمة سعة 50 ملليلتر لامتصاص الشحميات من LipoCollector ، مما يقلل من حجم الماء الممتص في المحاقن. قم بربط قابس على طرف المحاقن للحفاظ على الأنسجة الدهنية معقمة. ضع المحاقن مع طرف لأسفل في كيس بلاستيكي معقم لبدء فصل الشحوم الشحمية عن مرحلة الماء.
ثم ضع الكيس في وعاء معقم. قم بتغطية الحاوية بستارة معقمة لتأمين البيئة المعقمة أثناء النقل. أغلق شقوق الجلد بمادة الخياطة المفضلة لدى الجراح.
ضع ثوبا ضاغطا حول البطن لتقليل الوذمة بعد العملية الجراحية. لصنع كتلة القضيب ، حقن بوبيفاكايين في موقعين ، أحدهما يوضع بطنيا والآخر ظهريا. أدخل الإبرة بأكملها في الأنسجة تحت الجلد ، ووجهها أفقيا إلى اليمين ، وحقن التخدير أثناء سحب الإبرة.
كرر الحقن ، مع توجيه الإبرة إلى اليسار. ضع جميع المواد الاستهلاكية والإنزيمات بشكل معقم على الطاولة المغطاة بمنشفة جراحية معقمة يمكن التخلص منها. امسح الجهاز بالإيثانول وقم بتحميل المجموعة الاستهلاكية.
ثم قم بتوصيل كيس من الرنين المرضع بالنظام. قم بإجراء سلسلة من الاختبارات شبه التلقائية قبل إضافة lipoaspirate. أثناء إعداد الجهاز ، دع الشحوم الشحمية تقف في أنبوب 50 ملليلتر للسماح للدهون بالانفصال عن المرحلة السائلة.
لاحظ الكمية الإجمالية للأنسجة الدهنية واستخدمها للتأكد من أن إجمالي كمية الدهون المحملة سيكون في نطاق سعة الجهاز. قم بتحميل الأنسجة عندما يطلب منك الجهاز ذلك. سوف تستنزف الماكينة السوائل الزائدة.
وزن كمية الأنسجة الدهنية وغسلها مع الرنين المرضعات. عندما يتم غسل الأنسجة وتصريفها ، قم بتوصيل كيس تسريب جديد ب 37 إلى 39 درجة مئوية من الرنينات المرضعة. أعد تشكيل الإنزيم المتاح تجاريا الذي يحتوي على مزيج الكولاجيناز والبروتياز في خمسة ملليلتر من الرنين المرضع.
تأكد من أن الجهاز يعرض كمية الإنزيم المراد حقنه في العلبة بالأنسجة الدهنية. بمجرد حقن الهضم الأنزيمي سيستمر حوالي 20 دقيقة. بعد هضم الأنسجة ، تحقق من فصل المحتوى إلى دهون عليا تحتوي على مرحلة صفراء وطبقة وردية سفلية تحتوي على الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون ، أو ADRCs.
دع الطبقة الوردية تستنزف في غرفة معالجة الخلايا في المجموعة الاستهلاكية ، تاركة طبقة الدهون وراءها. اسمح ل ADRCs بالتركيز في غرفة معالجة الخلايا أثناء جولات متعددة من الطرد المركزي. ثم أضف 10 ملليلتر من داخل القاعدة المعاد تشكيلها في الحلقات المرضعة.
يستمر التفاعل الأنزيمي لمدة 10 دقائق ويتم غسل ADRCs بعد ذلك. عندما يكتمل عزل ADRCs ، أعد تعليق الخلايا في خمسة ملليلترات من لاكتات رينجر واستنشق المحلول في حقنة سعة خمسة ملليلترات. قم بتركيب قفل Luer أنثى ثلاثي الاتجاهات على المحقنة وقم بشفط أربعة ملليلترات من ADRCs في حقنة معقمة أخرى بسعة خمسة ملليلترات.
انقل آخر ملليلتر من ADRCs إلى حقنة ملليلتر واحدة. استخدم هذا المصطلح لتحليلات توصيف ADRC ، مثل عدد الخلايا ، وجدوى الخلية ، وتحليل علامات السطح بواسطة قياس التدفق الخلوي ، وقدرة تمايز ADRC. ضع إبرة قياس 25 على حقنة خمسة ملليلتر تحتوي على أربعة ملليلترات من ADRCs.
ثم قم بتعبئتها في ستارة معقمة. سيتم حقن هذا المحلول من ADRCs في المتلقي ويجب أن يحتوي في المتوسط على 8.4 إلى 32.7 مليون خلية. تأكد من أن محلول ADRCs يظل متجانسا عن طريق إمالة المحقنة بلطف حتى يتم حقنها في الجسم الكهفي.
ضع ستارة فتحة فوق القضيب. وعاصبة في جذر القضيب مع حلقة وعاء سيليكون. شد الحلقة وثبتها بملقط ، مما يجعل العاصبة ضيقة بما يكفي لوقف تدفق الدم من القضيب.
استخدم مسحتين مطهرتين لتطهير جلد القضيب في موقع الحقن. ثم حقن ملليلتر واحد من محلول ADRC بزاوية مباشرة في الجسم الكهفي ، على الجانب الأيمن في مكانين مختلفين. كرر هذه الخطوة في الجسم الكهفي الأيسر ، مع حقن حجم إجمالي قدره أربعة ملليلترات.
تم اختبار هذه الطريقة في المرحلة الأولى من التجارب السريرية المفتوحة على 21 رجلا بمتوسط عمر 60 عاما وانتصاب طبيعي وحياة جنسية نشطة قبل استئصال البروستاتا الجذري. كما عانى ستة من الرجال من سلس البول. تلقى جميع الرجال حقنة كهفية واحدة من ADRCs المعزولة وتبعتهم أربع زيارات في العيادة الخارجية في 1 و 3 و 6 و 12 شهرا بعد الحقن.
لم تقع أي أحداث خطيرة خلال وقت الملاحظة. أبلغ ثمانية رجال عن احمرار وتورم عابرين في مواقع الحقن ، وأبلغ ثلاثة عن رد فعل في منطقة القضيب. عانى ثمانية رجال من أحداث طفيفة قابلة للانعكاس تتعلق بشفط الدهون ، مثل عدم الراحة الخفيفة في البطن والأورام الدموية البسيطة في البطن.
لم يبلغ أي مريض عن عدم ارتياحه في متابعة شهر واحد. تم تقييم وظيفتهم الجنسية مع المؤشر الدولي لوظيفة الانتصاب خمسة ودرجة صلابة الانتصاب. أفاد ثمانية من أصل 15 رجلا في مجموعة القارة أن وظيفة الانتصاب لديهم كانت كافية للجماع في 12 شهرا.
لم تظهر المجموعة المكونة من ستة رجال مصابين بسلس البول أي تحسن في وظيفة الانتصاب عند محاولة هذا البروتوكول ، ضع في اعتبارك أن الإنزيمات التي يتم استخدامها أثناء إجراء العزل يجب إخراجها من الفريزر أو الثلاجة قبل ساعتين من بدء الإجراء. وقد مهدت نتائج هذه التقنية الطريق لإجراء التجارب العشوائية المضبوطة حيث يتم استكشاف آثار الخلايا الجذعية الدهنية على نطاق أوسع.
