التوليف وتوصيف للمشيمة شوندروتن سلفات (بلكسا)-استهداف المحتوى الدهني-بوليمر جسيمات نانوية

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال تسليم الدواء، مثل التسليم المستهدف للعلاجات لسرطانات الإنسان ومشيمة المثانة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها طريقة بسيطة وقابلة للاستنساخ لتجميع الببتيدات المترافقة في جسيمات أخرى. للبدء، إضافة ثلاثة ملليمترات من أربعة في المئة الإيثانول إلى أنبوب جهاز طرد مركزي معقمة 10 ملليلتر.

ثم، إضافة 90 ميكروغرام من فول الصويا الليسيثين حل الأسهم، 210 ميكروغرام من حمض حمض DSPE-PEG-حل، و 750 ميكروغرام من محلول المخزون DOX. استخدام حقنة ملليلتر واحد إلى ماصة اثنين ملليغرام من محلول الأسهم PLGA. ضع أنبوب الطرد المركزي في حمام ثلج على معالج بالموجات فوق الصوتية و sonicate لمدة دقيقتين.

ثم، إضافة PLGA الأسهم حل إسقاط الحكمة في أنبوب الطرد المركزي. لتنقية DNPs، استخدم فلتر الطرد المركزي لغسل الحل في 0.1 مُضجر مُخزنة. ثم، الطرد المركزي الحل في 1000 G لمدة ثلاث دقائق في أربع درجات مئوية.

لبدء تنشيط استر، إضافة 0.4 ملليغرام من EDC إلى ملليلتر واحد من DNPs. ثم، إضافة 0.24 ملليغرام من NHS إلى رد الفعل. ثم، السماح للتفاعل أن يحدث لمدة تصل إلى ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.

بعد ذلك ، اخلط مكونات التفاعل تمامًا ووضع رد الفعل على شاكر. لبدء تفاعل أمين، استخدم برنامج تلفزيوني لزيادة درجة اله المخزن المؤقت من 7.2 إلى 7.5. ثم، إضافة 0.5 ملليغرام من pICSA استهداف الببتيد إلى حل رد الفعل.

اخلط الحل جيداً وضعه على شاكر. ثم، السماح لرد فعل للمضي قدما في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها في الظلام. في اليوم التالي، تعبئة أكياس غسيل الكلى مع حل مترافق.

تنقية DNPs pICSA مع حاجز برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة في الظلام. بعد زراعة الخلايا وفقا لبروتوكول النص، وإزالة وسائل الإعلام وإضافة ملليلتر واحد من الطازجة، وسائل الإعلام الباردة مع خمسة في المئة FBS وPICSA DNPs أو DNPs. ثم، احتضان الخلية وخليط الجسيمات النانوية لمدة ساعة واحدة في أربع درجات مئوية.

بعد ذلك، قم بإزالة الوسائط واغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني. ثم، إضافة ملليلتر واحد من وسائل الإعلام الطازجة واحتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. بعد ذلك، قم بإزالة الوسائط واغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني.

ثم، إضافة ملليلترين من البرد، أربعة في المئة PFA واحتضان الخليط في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. إزالة PFA وغسل الخلايا مع مليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني. ثم، إضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني مع DAPI لتلوين النوى.

السماح للخليط لاحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. وأخيرا، إضافة المتوسطة المتصاعدة والصورة الفلوريسنس مع المجهر الفلوريسين. باستخدام هذا البروتوكول، تم إعداد DNPs بنجاح ومترافقة مع pICSA BP. وبعد اقترانها، زاد قطر الـ DNPs الأولية إلى حوالي 109 نانومتر.

وأظهرت صور TEM للDNPs وDNPs pICSA أن الجسيمات كانت مشتتة بشكل جيد وظهرت عموما مورفولوجيا كروية. وكانت إمكانات زيتا للجسيمات النانوية سالبة 20.1 و29.9 ميليفولت، مما يشير إلى أن الجسيمات النانوية مستقرة للغاية. وأشار فحص امتصاص الخلية JEG3 DNPs pICSA ملزمة إلى خلايا JEG3 في غضون 30 دقيقة.

لذلك، تمت الاقتران PICSA BP بكفاءة إلى السطح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن sonicate الخليط لمدة دقيقة إلى دقيقتين قبل إضافة PLGA. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ أساليبنا مثل فحص HPLC من أجل تحديد كفاءة الاقتران بشكل أكثر دقة.

بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال البيولوجيا الإنجابية لاستكشاف إمكانية علاج استهداف المشيمة في مضاعفات الحمل.