Name: an inexpensive, scalable behavioral assay for measuring ethanol sedation sensitivity and rapid tolerance in drosophila
Uploaded: 2015-04-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila at JoVE.com

These studies were supported by grants from the National Institutes of Health, National Institute for Alcoholism and Alcohol Abuse to M.G. (P20AA017828, R01AA020634, P50 AA022537). The authors thank Jill Bettinger for helpful discussions and Jacqueline DeLoyht for technical assistance.

1. يوم قبل الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الذباب في قوارير المواد الغذائية الطازجة في مجموعات من 11 (جنس واحد) تحت جيزة (1-5 دقيقة) CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الذباب لاستعادة O / N في قارورة الغذاء في المساحات الخاضعة للسيطرة للبيئة (عادة 25 درجة مئوية والرطوبة النسبية 60٪، و 12 ساعة ضوء / دورة الظلام). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل الإيثانول (ق) عن طريق تمييع النقي (100٪) الايثانول في تنقية (≥18 MΩ) الماء إلى التركيز النهائي (ق) المناسب للتجربة المخطط لها. تسمح الحل (ق) للعودة إلى RT O / N. ملاحظة: التخفيف من الايثانول هو طارد للحرارة. </li></ol> 2. يوم من الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل قارورة من الذباب لفحصها، وإعداد (ط) نظيفة، فارغة قنينة الغذائي؛ أي اختبار قنينة، (ب) الجديد المكونات خلات السليلوز، (ج) سدادة سيليكون و (د) 1 مل من محلول الإيثانول (انظر الجدول 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد غرفة الاختبار عن طريق ضبط درجة الحرارة إلى 20-25 درجة مئوية والرطوبة النسبية إلى 55-65٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هل لديك عامل آخرتعيين رمز فريد لكل مجموعة من قارورة وتسجيل رمز في وقت لاحق. ضع قارورة مشفرة مع الذباب في غرفة الاختبار حتى يتأقلم لدقائق قليلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية قارورة اختبار فارغة لمطابقة الرموز على قارورة ذبابة من 2.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بناء الصعب سجل اختبار نسخة عن طريق إدخال رموز في أعمدة (عمود واحد / قارورة) في جدول بيانات مشابهة لجدول 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام السجل اختبار كدليل، وترتيب قارورة الغذاء مشفرة مع الذباب وقارورة اختبار فارغة إلى مطابقة صفائف في قاعة الاختبار. ملاحظة: الحد الأقصى معقول من قارورة لاختبار هو 24 (أي 6 مجموعات من 4 قوارير لكل منهما). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الذباب من قوارير الطعام إلى مطابقة / وصفت قارورة اختبار فارغة وإدراج فورا السليلوز المقابس خلات في قارورة الاختبار حتى السليلوز المقابس خلات هي 2 سم تحت قمم القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآخرة، والتعامل مع كل صف من أربعة قوارير كمجموعة في متداخلة 1 دقيقة فترات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقييم الوقت 0، فهم كل قارورة بشكل فردي ثالإبهام والسبابة إيث، اضغط بلطف على الطاولة ثلاث مرات لضرب الذباب إلى أسفل القارورة، وانتظر 30 ثانية ثم حساب عدد من الذباب التي هي غير متحرك / الأموات. تسجيل عدد غير متحرك / الذباب الميت لكل قنينة في الساعة 0 دقيقة في سجل الاختبار الورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء الموقت تعول بشكل مستمر في الوقت 0 وتبدأ على الفور بإضافة 1 مل من الإيثانول إلى السليلوز المقابس خلات في قارورة لأول صف / مجموعة من 4 قوارير. إضافة 1 مل من الايثانول إلى المقابس خلات السليلوز في قارورة في 5 فترات ثانية بالترتيب الذي سيتم اختبار. إضافة الإيثانول إلى المقابس خلات السليلوز في حركة دائرية بحيث يتم استيعاب الإيثانول بالتساوي في جميع أنحاء المقابس خلات السليلوز. عندما تمت إضافة الإيثانول إلى كل قارورة اختبار 4 في المجموعة، وإدراج المكونات سيليكون في كل قارورة لختم عليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي بعض الأحيان 1، 2، 3، 4 و 5 دقائق، إضافة 1 مل من الايثانول إلى الثالثة والرابعة والمجموعتين الثانية والخامسة والسادسة من 4 قوارير، على التوالي. مواصلة إدخال سدادات سيليكون بعدمضيفا الإيثانول إلى كل مجموعة من 4 قوارير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في وقت 6 دقائق، واختبار أول مجموعة من 4 قوارير من استيعاب كل قارورة مع الإبهام والسبابة، والتنصت بلطف على الطاولة ثلاث مرات لضرب الذباب إلى أسفل القارورة، والانتظار 30 ثانية ثم عد وتسجيل العدد الإجمالي لل الذباب التي يتم مخدرا. النتيجة الذباب كما مخدرا إذا كانوا (ط) الوقوف على أرضية القارورة ولكن لا يمشي أو (ب) الاستلقاء على ظهورهم مع أو بدون ترفرف أجنحتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعامل مع كل قارورة ضمن مجموعة في 5 فترات ثانية باستخدام الجدول الزمني في الجدول 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في أوقات 7 و 8 و 9 و 10 و 11 دقيقة، واختبار المجموعتين الثانية والثالثة والرابعة والخامسة والسادسة من قوارير، على التوالي، كما فعلت لمجموعة العشرين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في وقت 12 دقيقة، واختبار أول مجموعة من 4 قوارير مرة أخرى كما هو موضح في 2.12 ومواصلة اختبار الثالثة والرابعة والمجموعتين الثانية والخامسة والسادسة من قارورة في 13 و 14 و 15 و 16 و 17 دقيقة على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة الذباب الاختبار كما هو موضح في 2.12 حتى كل الذباب هي الصورةedated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل عدد من الذباب في كل قارورة في سجل الصعب اختبار نسخة. فرض رقابة متحركة / الذباب الميت في وقت و0 من إجمالي عدد الذباب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الذباب النشطة في المئة في كل مرة التقييم نقطة والبيانات مؤامرة كما الذباب النشطة٪ (المحور الصادي) مقابل الوقت (محور س). Quantitate الإيثانول التخدير عن طريق التحريف التخدير الوقت 50 القيم (ST50، والوقت ل50٪ التخدير) من ثالث ترتيب منحنى متعدد الحدود أو السيني يناسب أو حساب المساحة تحت منحنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع البيانات من قارورة فك الشفرة وإجراء التحليلات الإحصائية (على سبيل المثال، في اتجاه واحد ANOVA مع Bonferroni التجارب المقارنة متعددة) بما يتناسب مع التصميم التجريبي. </li></ol>

<ol>
	<li>Rehm, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+disease+and+injury+and+economic+cost+attributable+to+alcohol+use+and+alcohol-use+disorders.">Global burden of disease and injury and economic cost attributable to alcohol use and alcohol-use disorders.</a> Lancet. 373, 2223-2233 (2009).</li><li>Prescott, C. A., Kendler, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+environmental+contributions+to+alcohol+abuse+and+dependence+in+a+population-based+sample+of+male+twins.">Genetic and environmental contributions to alcohol abuse and dependence in a population-based sample of male twins.</a> The American journal of psychiatry. 156, 34-40 (1999).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+alcohol+research.">The evolution of Drosophila melanogaster as a model for alcohol research.</a> Annual review of neuroscience. 36, 121-138 (2013).</li><li>Scholz, H., Mustard, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invertebrate+Models+of+Alcoholism.">Invertebrate Models of Alcoholism.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 433-457 (2011).</li><li>Rodan, A. R., Rothenfluh, A., Reilly, M. T., Lovinger, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Functional Plasticity and Genetic Variation: Insights into the Neurobiology of Alcoholism. 91, (2010).</li><li>Schumann, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+association+and+genetic+functional+studies+identify+autism+susceptibility+candidate+2+gene+(AUTS2)+in+the+regulation+of+alcohol+consumption.">Genome-wide association and genetic functional studies identify autism susceptibility candidate 2 gene (AUTS2) in the regulation of alcohol consumption.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 7119-7124 (2011).</li><li>Corl, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Happyhour,+a+Ste20+family+kinase,+implicates+EGFR+signaling+in+ethanol-induced+behaviors.">Happyhour, a Ste20 family kinase, implicates EGFR signaling in ethanol-induced behaviors.</a> Cell. 137, 949-960 (2009).</li><li>Moore, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+intoxication+in+Drosophila:+Genetic+and+pharmacological+evidence+for+regulation+by+the+cAMP+signaling+pathway.">Ethanol intoxication in Drosophila: Genetic and pharmacological evidence for regulation by the cAMP signaling pathway.</a> Cell. 93, 997-1007 (1998).</li><li>Scholz, H., Franz, M., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hangover+gene+defines+a+stress+pathway+required+for+ethanol+tolerance+development.">The hangover gene defines a stress pathway required for ethanol tolerance development.</a> Nature. 436, 845-847 (2005).</li><li>Riley, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+dependence+is+associated+with+the+ZNF699+gene,+a+human+locus+related+to+Drosophila+hangover,+in+the+Irish+affected+sib+pair+study+of+alcohol+dependence+(IASPSAD)+sample.">Alcohol dependence is associated with the ZNF699 gene, a human locus related to Drosophila hangover, in the Irish affected sib pair study of alcohol dependence (IASPSAD) sample.</a> Molecular psychiatry. 11, 1025-1031 (2006).</li><li>Morozova, T. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+sensitivity+in+Drosophila:+translational+potential+of+systems+genetics.">Alcohol sensitivity in Drosophila: translational potential of systems genetics.</a> Genetics. 183, 733-745 (2009).</li><li>Ogueta, M., Cibik, O., Eltrop, R., Schneider, A., Scholz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+Adh+function+on+ethanol+preference+and+tolerance+in+adult+Drosophila+melanogaster.">The influence of Adh function on ethanol preference and tolerance in adult Drosophila melanogaster.</a> Chemical senses. 35, 813-822 (2010).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+GWASs+and+human+protein+interaction+networks+identifies+a+gene+subnetwork+underlying+alcohol+dependence.">Integrating GWASs and human protein interaction networks identifies a gene subnetwork underlying alcohol dependence.</a> American journal of human genetics. 93, 1027-1034 (2013).</li><li>Lind, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genomewide+association+study+of+nicotine+and+alcohol+dependence+in+Australian+and+Dutch+populations.">A genomewide association study of nicotine and alcohol dependence in Australian and Dutch populations.</a> Twin Res Hum Genet. 13, 10-29 (2010).</li><li>Schuckit, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+level+of+response+to+alcohol+as+a+predictor+of+future+alcoholism.">Low level of response to alcohol as a predictor of future alcoholism.</a> The American journal of psychiatry. 151, 184-189 (1994).</li><li>Schuckit, M. A., Smith, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+8-year+follow-up+of+450+sons+of+alcoholic+and+control+subjects.">An 8-year follow-up of 450 sons of alcoholic and control subjects.</a> Archives of general psychiatry. 53, 202-210 (1996).</li><li>Tabakoff, B., Cornell, N., Hoffman, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+tolerance.">Alcohol tolerance.</a> Ann Emerg Med. 15, 1005-1012 (1986).</li><li>Chan, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+Influences+of+Drosophila+white/mini-white+on+Ethanol+Sensitivity+in+Two+Different+Behavioral+Assays.">Contrasting Influences of Drosophila white/mini-white on Ethanol Sensitivity in Two Different Behavioral Assays.</a> Alcohol Clin Exp Res. 38, 1582-1593 (2014).</li><li>Eddison, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=arouser+reveals+a+role+for+synapse+number+in+the+regulation+of+ethanol+sensitivity.">arouser reveals a role for synapse number in the regulation of ethanol sensitivity.</a> Neuron. 70, 979-990 (2011).</li><li>Wen, T., Parrish, C. A., Xu, D., Wu, Q., Shen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+neuropeptide+F+and+its+receptor,+NPFR1,+define+a+signaling+pathway+that+acutely+modulates+alcohol+sensitivity.">Drosophila neuropeptide F and its receptor, NPFR1, define a signaling pathway that acutely modulates alcohol sensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 2141-2146 (2005).</li><li>Bhandari, P., Kendler, K. S., Bettinger, J. C., Davies, A. G., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+for+evoked+locomotor+behavior+in+Drosophila+reveals+a+role+for+integrins+in+ethanol+sensitivity+and+rapid+ethanol+tolerance.">An assay for evoked locomotor behavior in Drosophila reveals a role for integrins in ethanol sensitivity and rapid ethanol tolerance.</a> Alcohol Clin Exp Res. 33, 1794-1805 (2009).</li><li>Bhandari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chloride+intracellular+channels+modulate+acute+ethanol+behaviors+in+Drosophila,+Caenorhabditis+elegans+and+mice.">Chloride intracellular channels modulate acute ethanol behaviors in Drosophila, Caenorhabditis elegans and mice.</a> Genes, brain, and behavior. 11, 387-397 (2012).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).</li><li>Chen, J., Wang, Y., Zhang, Y., Shen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+Bacchus+reveal+a+tyramine-dependent+nuclear+regulator+for+acute+ethanol+sensitivity+in+Drosophila.">Mutations in Bacchus reveal a tyramine-dependent nuclear regulator for acute ethanol sensitivity in Drosophila.</a> Neuropharmacology. 67, 25-31 (2013).</li><li>Lasek, A. W., Giorgetti, F., Berger, K. H., Tayor, S., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lmo+genes+regulate+behavioral+responses+to+ethanol+in+Drosophila+melanogaster+and+the+mouse.">Lmo genes regulate behavioral responses to ethanol in Drosophila melanogaster and the mouse.</a> Alcohol Clin Exp Res. 35, 1600-1606 (2011).</li><li>Maples, T., Rothenfluh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+way+to+measure+ethanol+sensitivity+in+flies.">A simple way to measure ethanol sensitivity in flies.</a> J Vis Exp. , e2541 (2011).</li><li>Rothenfluh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+behavioral+responses+to+ethanol+are+regulated+by+alternate+RhoGAP18B+isoforms.">Distinct behavioral responses to ethanol are regulated by alternate RhoGAP18B isoforms.</a> Cell. 127, 199-211 (2006).</li><li>Rothenfluh, A., Troutwine, B. R., Ghezzi, A., Atkinson, N. S., Nohronha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+23.">Ch. 23.</a> Neurobiology of Alcohol Dependence. 23, 467-495 (2014).</li><li>Jones, M. A., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+model+for+age-related+impairment+in+locomotor+and+other+behaviors.">Drosophila as a model for age-related impairment in locomotor and other behaviors.</a> Experimental gerontology. 46, 320-325 (2010).</li><li>Martin, I., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+damage+and+age-related+functional+declines.">Oxidative damage and age-related functional declines.</a> Mechanisms of ageing and development. 127, 411-413 (2006).</li><li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ethanol+responses+in+Drosophila+are+sexually+dimorphic.">Acute ethanol responses in Drosophila are sexually dimorphic.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 21087-21092 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

المقايسات واضحة أن quantitate بتكاثر الظواهر ذات معنى هي ذات قيمة كبيرة لتحليل السلوك. العمل الموصوف هنا يتناول عدة جوانب العملية لفحص لقياس حساسية الايثانول التخدير والتسامح السريع في ذبابة الفاكهة. على الرغم من عدم التركيز لهذا العمل، وتسهيل التحليلات السلوكية من خلال الحفاظ على البيئة وثابت الخلفية الوراثية للاختبار المواضيع ضمن الدراسة. وعلاوة على ذلك، ينبغي عادة أن إجراء مقارنات بين مجموعات من الذباب تربى واختبارها جنبا إلى جنب. تحقيقا لهذه الغاية، كان كل الذباب في التجارب الفردية في هذا العمل نفس الخلفية الوراثية وتم تربية جنبا إلى جنب تحت ظروف بيئية موحدة (25 درجة مئوية والرطوبة النسبية 60٪، و 12 ساعة ضوء / دورة الظلام) مع معيار المتوسطة الطعام (10 ٪ سكروز، 3.3٪ دقيق الذرة، 2٪ الخميرة و 1٪ أجار) باستثناء تلك التجارب التي تم التلاعب بها وسيلة الغذاء صراحة. وETHأنول فحص التخدير الموصوفة هنا يتطلب عدد قليل جدا من المواد (قارورة بلاستيكية، والمقابس خلات السليلوز، سدادات سيليكون والإيثانول)، والتي هي غير مكلفة ومتاحة بسهولة من مصادر تجارية (الجدول 3). هذا الاختبار الإيثانول التخدير يشبه وإلى حد كبير على أساليب ذكرت سابقا (على سبيل المثال، 6،20،25-27، استعرض شامل في 3،28). على الرغم من كل هذه المقايسات يكون أداة لقياس حساسية الايثانول التخدير، وصفت مزايا للمقايسة هنا تشمل لا يتعرض (ط) الذباب لالإيثانول السائل أثناء الفحص، (ب) انخفاض احتمال أن الذباب يمكن أن يصبح متشابكا في القطن أو مواد أخرى في قنينة اختبار أثناء الفحص، (ج) القدرة على اختبار مجموعات كثيرة من الذباب في موازاة ذلك، و (د) ثلاثة خيارات لتقدير موضوعي للحساسية الإيثانول من مجموعات البيانات الأولية. معا، وهذه المزايا القضاء إلى حد كبير إمكانية أن يطير الشراب الإيثانول، ثار الإيثانول يمكن أن تبلل الأسطح الخارجية من الذباب الأمر الذي يعيق قدرات الحركي الشاملة، ويمكن أن أداء مرتبك من الذباب في مقايسة التي كتبها الصعوبات المرتبطة المشركة المواد في بيئة الاختبار. بالإضافة إلى ذلك، هذه المزايا زيادة الإنتاجية الشاملة واستنساخ للمقايسة. وعلاوة على ذلك، لا تؤثر حساسية الايثانول قياس في هذا الاختبار عن طريق التعبير عن الذاتية الأبيض أو علامة المعدلة وراثيا مصغرة الأبيض 18، مما يجعلها مناسبة للدراسات مع الجينات المحورة والخلفيات الوراثية التي يشيع استخدامها في التحليلات الوراثية ذبابة الفاكهة. ينبغي أن تسيطر العديد من المعلمات الرئيسية للحصول على نتائج موثوقة من المقايسات الإيثانول التخدير. بالإضافة إلى التحكم في بيئة النمو والخلفية الوراثية للسلالات التي يجري اختبارها (انظر أعلاه)، وحجم وتركيز الايثانول وبالطبع في غاية الأهمية لتحديد الكميات من الإيثانول sensitiviتاي. لاحظ أن التخفيف من الايثانول في الماء هو طارد للحرارة. وبناء على ذلك، ينبغي أن يسمح للحلول الايثانول المخفف لكي تتوازن لRT قبل الشروع في المقايسات التخدير. معلمة إضافية التي ينبغي إدخالها موحدة عبر المجموعات التي يجري اختبارها هي طول الفترة الزمنية التي الذباب ويعيش في قارورة فارغة الغذائية قبل بدء فحص التخدير. وينبغي أيضا أن يسيطر معلمتين إضافية. عدد الذباب في قارورة يجب أن يكون مثاليا (أ) هي نفسها في كل قارورة والجماعات، (ب) وهو الرقم الذي يمكن عدها بسهولة بسرعة، و (ج) عدد كبير بما يكفي للسماح للتخدير سلس نسبيا وقت الدورات. أحد عشر الذباب / قارورة يعمل بشكل جيد في مختبرنا وهي نقطة انطلاق المقترحة. معلمة النهائية للنظر هو عمر الذباب المستخدمة في المقايسات التخدير. وعلى الرغم من عدم وجود آثار استنساخه من العمر على حساسية الايثانول التخدير في الذباب القديمة 1-10 يوم تم العثور على (لا تظهر البيانات)، واستخدام الشباب الحيوانات العمر المتطابقة يبدوبرر نظرا للأدب كبير على التغيرات السلوكية المرتبطة بالعمر في الذباب 29،30. لا يبدو غيرها من المعالم كما حاسما في المقايسات التخدير، على الأقل عند اختبار الذباب التحكم باستخدام نطاقات المعلمات الموصوفة هنا. الجنس، قوة والتنصت، ووقت الشفاء من التنصت، والمكملات الغذائية من الذباب مع المضادات الحيوية (الأمبيسلين، التتراسيكلين والكلورامفينيكول) أو الخميرة الحية لا تغير حساسية الايثانول قياس كما هو موضح هنا. وبالمثل، quantitating حساسية الإيثانول عن طريق الاستيفاء من ثالث ترتيب منحنيات متعددة الحدود، الاستيفاء من منحنيات السيني، أو قرار من الجامعة الأمريكية بالقاهرة من التخدير الأساسي الوقت بالطبع البيانات يؤدي إلى تفسيرات يمكن تمييزها بشكل أساسي. على الرغم من عدم تأثير الجنس لوحظ باستمرار في الدراسات الموصوفة هنا، تم الإبلاغ عن آثار الجنس على حساسية الايثانول في عدة خلفيات وراثية ذبابة الفاكهة 31. وبالتالي، فمن الممكن أن الآثار كانت الجنسملثمين ببساطة عن طريق التباين الوراثي في ث [A] الخلفية المستخدمة هنا. بدلا من ذلك، فمن الممكن أن قياس تأثيرات الجنس على الاستجابات السلوكية في ذبابة الفاكهة تتطلب فحص أو النمو الشروط التي مجهولة حتى الان. في أي حال، فإن التوصية لجعل جميع المعلمات متجانسة بقدر الإمكان في المقايسات التخدير، بما في ذلك ممارسة الجنس في أي مجموعة يجري مقارنة صراحة. وبالنظر إلى أن الخميرة الحية تنتج كميات كبيرة من الايثانول في ذبابة الطعام، كان مفاجئا بعض الشيء أن مكملات الغذاء مع الخميرة الحية لم تزد الإيثانول الداخلي في الذباب. أحد التفسيرات المحتملة هو أن لا يتم إنتاج الإيثانول بشكل موحد عبر السطح من المواد الغذائية والذباب قد تناول طعاما بالتالي انتقائي الغذاء مع عدم وجود أو تركيزات منخفضة نسبيا من الايثانول. سوف تكون هناك حاجة دراسات إضافية لمعالجة هذه المسألة وتفسيرات أخرى ممكنة لهذه النتيجة. وهناك عدد كبير من التعديلات على describ الفحصإد ممكنة هنا اعتمادا على أهداف التجربة التي يتم تنفيذها. على سبيل المثال، اختبار عدد من قوارير في تجربة، وعدد من الذباب اختبارها في كل قارورة، وتركيز وحجم الإيثانول المستخدمة، ومدة التعرض الإيثانول، الفاصل الزمني بين التقييمات التخدير، سن وجنس الذباب اختبار ، ومعايير التخدير يمكن لجميع تعديلها لتتناسب مع احتياجات مختبر الفردية. التوصية هو أن تبدأ مع واحد أو اثنين من مجموعات من أربعة قوارير عندما تعلم في البداية فحص ومن ثم الارتقاء إلى استخدام عدد من القنينات التي توفر الإنتاجية اللازمة للمشروع. ينبغي مراعاة ST50s قصيرة أو طويلة بشكل غير متوقع، سيكون من الممارسات الجيدة لضمان تعرضوا أن اختبار الذباب إلى قصيرة (1-5 دقائق) مرات التخدير سمح، للتعافي من التخدير O / N، كانت أقل من 10 يوما من العمر، كانت لا تضررت ماديا أثناء التداول، لم المبللة التي كتبها حل الإيثانول، وليس لديها ضعف الحركي. التدابير فحص الإيثانول حساسية التخدير فقط، وبالتالي ليست مصممة أو مناسبة لتقييم الاستجابات السلوكية الأخرى لالايثانول. مثل كل النماذج السلوكية الإيثانول المعروفة في الذباب، وهذا الاختبار يتطلب الذباب لديك قدرات الحركي العادية إلى حد كبير، وبالتالي المورثات يعانون من ضعف تحرك لا ينبغي اختبارها. الحد آخر من الاختبار هو أن تركيز بخار الإيثانول في قنينة ويفترض أن ترتفع بشكل مستمر حيث تطاير المخدرات من المكونات خلات السليلوز. وعلى الرغم من الإيثانول الداخلي الذباب &quot;يرتفع تدريجيا مع مرور الوقت في جميع يطير الإيثانول المقايسات السلوكية، يبدو من الممكن أن يسلم على تركيز ثابت من بخار الإيثانول إلى الذباب يمكن تحسين اتساق النتائج من هذا الاختبار. لم يتم حتى الآن تحديد طريقة لايصال على تركيز ثابت من بخار الإيثانول من شأنه أن يسمح للمقايسة لاستخدامها على نطاق وصفها هنا. التخدير الإيثانولمقايسة الموصوفة هنا هي مناسبة تماما لتحليل الجيني للحساسية الايثانول والتسامح السريع 18. بيئة النمو، والخلفية الوراثية، وتركيز وحجم الإيثانول، ومقدار الوقت الذي يقضيه الذباب في قارورة فارغة الغذائية، وينبغي التحكم في عدد وعمر الذباب تستخدم جميع. على افتراض يتم التحكم بشكل كاف هذه المعايير، ينبغي أن يكون الفحص التخدير مناسبة لكلا عكس وإلى الأمام النهج الوراثية التي بالتحقيق في الأساس الجزيئي للاستجابات سلوكية لالايثانول في ذبابة الفاكهة.

اضطراب تعاطي الكحول (AUD) هو مشكلة صحية هائلة في جميع أنحاء العالم (مراجعة في 1). على الرغم من أن آليات القيادة وتطوير AUD معقدة، هذه الاضطرابات لها عنصر وراثي كبير (على سبيل المثال، 2). والتوريث كبير من AUD والاستجابات السلوكية الحفظ إلى الايثانول عبر العديد من الأنواع (التي استعرضت في 3،4) قد ولدت اهتماما كبيرا في استخدام الكائنات نموذج الجينية للتحقيق في تورط جينات معينة في السلوكيات المرتبطة الايثانول نحو فهم أفضل لالأساس الجزيئي لل AUD. ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة، برزت كشركة رائدة كائن نموذج لاستكشاف الآليات الجزيئية الوراثية من السلوكيات المرتبطة الإيثانول (استعراضها في 3،4). وقد أبرزت الدراسات في الذباب الأدوار لعدة مسارات إشارات في الاستجابات السلوكية لالإيثانول (استعراضها في 5). يثير الاهتمام والفضول، وبعض من الجينات والممرات التي تؤثر على رد و السلوكيةكما تم توريط وفاق لالايثانول في الذباب في السلوكيات المرتبطة الايثانول القوارض و / أو AUD البشري (على سبيل المثال، 6-14). الحفاظ على آليات القيادة السلوكيات المرتبطة الإيثانول عبر الأنواع، إلى جانب مجموعة من الأدوات الجينية المتاحة في نظام نموذجي ذبابة الفاكهة، تؤكد فائدة نموذج ذبابة الفاكهة للتحقيق في علم الوراثة من الاستجابات السلوكية لالايثانول. ويرتبط حساسية 15،16 والتسامح (استعراضها في 17) إلى الإيثانول في البشر في تطوير AUD. كل من هذه الاستجابات السلوكية لالإيثانول يمكن أن تكون على غرار في الذباب عن طريق مجموعة متنوعة من فحوصات المختبر (استعراضها في 3،4). تعتمد كل من المقايسات ذبابة معروفة للمؤلفين على أي تعتمد على الوقت الإيثانول الناجم عن التخدير / اتناسق أو الانتعاش تعتمد على الوقت من الإيثانول التخدير. في مقال سابق من مجموعتنا على الوراثة من حساسية الايثانول و rالتسامح APID في ذبابة الفاكهة، تم استخدام الفحص السلوكي على أساس الايثانول التخدير الناجم عن بخار من الذباب (18). وقد بدأ اختبار في هذا الاختبار عن طريق نقل الكبار يعيش الذباب بدون تخدير لتفريغ قارورة الغذاء، ومحاصرة الذباب في قارورة مع المكونات خلات السليلوز، مضيفا الإيثانول إلى الأعلى (أي الجانب غير الطيران) من السليلوز خلات المكونات، و ختم القارورة التي تحتوي على الذباب، والسليلوز خلات التوصيل والايثانول مع سدادة سيليكون (انظر التخطيطي في الشكل S3، مرجع 18). تم تقييم قوارير متعددة تمثل مجموعات مختلفة من الذباب في موازاة ذلك، زيادة الإنتاجية من هذا الاختبار. أعطيت قارورة رمز المجهولين وتم أعمى المجربون لمجموعة العلاج لمنع التحيز غير المقصود في تقييم التخدير. في تجربة القياسية، الذباب في قارورة تم استغلالها بلطف في 6 دقائق فترات، وبعد الشفاء 30 ثانية، وقد أحصى عدد الذباب مخدرا في كل قارورة والمحولد أن الذباب النشطة في المئة. استوعبت الذباب الإيثانول بخار من المكونات خلات السليلوز بطريقة تعتمد على الوقت، مما تسبب في زيادات تدريجية في الإيثانول الداخلي 18 والتخدير (المرجع CF 18 و الشكل 1A و 1B في هذا التقرير). وقد تم تعريف التخدير في هذا الاختبار عمليا كما الذباب (ط) مكانة في غياب المشي أو (ب) الكذب على ظهورهم مع أو بدون ترفرف أجنحتها. هنا، يتم وصف هذا الإيثانول التخدير فحص بالتفصيل، يتم توفير مزيد من التحسين التشغيلي ذات الصلة لاستخدامه، ويستخدم في فحص لمعالجة مساهمة خيارات مكملات الغذائية على حساسية ذبابة التخدير.

<table><tbody><tr><td>food vials</td><td>VWR</td><td>89092-772</td><td>narrow</td></tr><tr><td>Flugs</td><td>Genesee/flystuff.com</td><td>49-102</td><td>narrow</td></tr><tr><td>silicone stopper</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-704-1l</td><td>#4</td></tr><tr><td>ethanol</td><td>Pharmaco-Aaper</td><td>111000200</td><td>200 proof</td></tr></tbody></table>

an inexpensive, scalable behavioral assay for measuring ethanol sedation sensitivity and rapid tolerance in drosophila

اضطراب تعاطي الكحول (AUD) هو التحدي صحية خطيرة. وعلى الرغم من عنصر وراثي كبير لAUD، وعدد قليل من الجينات قد تورطت بشكل لا لبس فيه في المسببات الخاصة بهم. ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة، هو نموذج قوي لاستكشاف الآليات الجزيئية الوراثية الكامنة وراء السلوكيات المتعلقة بالكحول، وبالتالي يحمل وعدا كبيرا لتحديد وفهم وظيفة الجينات التي تؤثر AUD. استخدام نموذج ذبابة الفاكهة لهذه الأنواع من الدراسات يعتمد على توافر فحوصات لقياس موثوق الاستجابات السلوكية لالايثانول. ويصف هذا التقرير مقايسة مناسبة لتقييم حساسية الايثانول والتسامح السريع في الذباب. ويتأثر حساسية الايثانول قياس في هذا الاختبار من خلال حجم وتركيز الإيثانول المستخدم، ومجموعة متنوعة من التلاعب الجيني ذكر سابقا، وأيضا طول الوقت ويعيش الذباب دون طعام مباشرة قبل الاختبار. في المقابل، الإيثانول الصورةلا يتأثر ensitivity قياس في هذا الاختبار من قبل قوة من معالجة الطاير، جنس الذباب، ومكملات متوسطة النمو مع المضادات الحيوية أو الخميرة الحية. وصفت ثلاث طرق مختلفة لquantitating حساسية الإيثانول، كل يؤدي إلى نتائج حساسية الإيثانول يمكن تمييزها بشكل أساسي. طبيعة قابلة للمن هذا الاختبار، جنبا إلى جنب مع بساطته الشاملة لانشاء ومنخفضة نسبيا حساب، وجعلها مناسبة لتحليل الصغيرة والكبيرة الحجم الوراثي للحساسية الايثانول والتسامح السريع في ذبابة الفاكهة.

Watch this Scientific Journal Video about An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila at JoVE.com

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Straightforward assays for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila facilitate the use of this model organism for investigating these important ethanol-related behaviors. Here, a relatively simple, scalable assay for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies is described.

و، الفحص السلوكية قابلة غير مكلفة لقياس الإيثانول التخدير الحساسية والتسامح السريع في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

an-inexpensive-scalable-behavioral-assay-for-measuring-ethanol

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

10.2K Views.  Virginia Commonwealth University. Straightforward assays for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila facilitate the use of this model organism for investigating these important ethanol-related behaviors. Here, a relatively simple, scalable assay for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies is described.

Video: An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in rodents have shown a direct link between testosterone and aggressive behavior1 and folk wisdom adapts these findings to humans, suggesting that testosterone induces antisocial, egoistic or even aggressive behavior2. However, many researchers doubt a direct testosterone-aggression link in humans, arguing instead that testosterone is primarily involved in status-related behavior3,4. As a high status can also be achieved by aggressive and antisocial means it can be difficult to distinguish between anti-social and status seeking behavior.
We therefore set up an experimental environment, in which status can only be achieved by prosocial means. In a double-blind and placebo-controlled experiment, we administered a single sublingual dose of 0.5 mg of testosterone (with a hydroxypropyl-&beta;-cyclodextrin carrier) to 121 women and investigated their social interaction behavior in an economic bargaining paradigm. Real monetary incentives are at stake in this paradigm; every player A receives a certain amount of money and has to make an offer to another player B on how to share the money. If B accepts, she gets what was offered and player A keeps the rest. If B refuses the offer, nobody gets anything. A status seeking player A is expected to avoid being rejected by behaving in a prosocial way, i.e. by making higher offers.
The results show that if expectations about the hormone are controlled for, testosterone administration leads to a significant increase in fair bargaining offers compared to placebo. The role of expectations is reflected in the fact that subjects who report that they believe to have received testosterone make lower offers than those who say they believe that they were treated with a placebo. These findings suggest that the experimental economics approach is sensitive for detecting neurobiological effects as subtle as those achieved by administration of hormones. Moreover, the findings point towards the importance of both psychosocial as well as neuroendocrine factors in determining the influence of testosterone on human social behavior.

The procedure described in this protocol shows that testosterone administration and folk beliefs about testosterone may be associated with directly opposed social behaviors.

الجمع بين السلوكية الغدد الصماء والاقتصاد التجريبي : التيستوستيرون والاجتماعي اتخاذ القرار

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

طريقة بسيطة لقياس حساسية الايثانول في الذباب

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

طريقة عامة لتقييم الحضانة لالتوق السكروز في الجرذان

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Recording and Analysis of Circadian Rhythms in Running-wheel Activity in Rodents

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, including rats, hamsters, and mice, are active during the night and relatively inactive during the day. Many other behavioral and physiological measures also exhibit daily rhythms, but in rodents, running-wheel activity serves as a particularly reliable and convenient measure of the output of the master circadian clock, the suprachiasmatic nucleus (SCN) of the hypothalamus. In general, through a process called entrainment, the daily pattern of running-wheel activity will naturally align with the environmental light-dark cycle (LD cycle; e.g. 12 hr-light:12 hr-dark). However circadian rhythms are endogenously generated patterns in behavior that exhibit a ~24 hr period, and persist in constant darkness. Thus, in the absence of an LD cycle, the recording and analysis of running-wheel activity can be used to determine the subjective time-of-day. Because these rhythms are directed by the circadian clock the subjective time-of-day is referred to as the circadian time (CT). In contrast, when an LD cycle is present, the time-of-day that is determined by the environmental LD cycle is called the zeitgeber time (ZT).
Although circadian rhythms in running-wheel activity are typically linked to the SCN clock6-8, circadian oscillators in many other regions of the brain and body9-14 could also be involved in the regulation of daily activity rhythms. For instance, daily rhythms in food-anticipatory activity do not require the SCN15,16 and instead, are correlated with changes in the activity of extra-SCN oscillators17-20. Thus, running-wheel activity recordings can provide important behavioral information not only about the output of the master SCN clock, but also on the activity of extra-SCN oscillators. Below we describe the equipment and methods used to record, analyze and display circadian locomotor activity rhythms in laboratory rodents.

Circadian rhythms in voluntary wheel-running activity in mammals are tightly coupled to the molecular oscillations of a master clock in the brain. As such, these daily rhythms in behavior can be used to study the influence of genetic, pharmacological, and environmental factors on the functioning of this circadian clock.

تسجيل وتحليل إيقاعات الساعة البيولوجية في تشغيل عجلة النشاط في القوارض

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, ...

The FlyBar: Administering Alcohol to Flies

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian clock modulates alcohol sensitivity, but not the formation of tolerance. Here, we describe our protocol in detail. Alcohol is administered to the flies using the FlyBar. In this setup, saturated alcohol vapor is mixed with humidified air in set proportions, and administered to the flies in four tubes simultaneously. Flies are reared under standardized conditions in order to minimize variation between the replicates. Three-day old flies of different genotypes or treatments are used for the experiments, preferably by matching flies of two different time points (e.g., CT 5 and CT 17) making direct comparisons possible. During the experiment, flies are exposed for 1 hr&#160;to the pre-determined percentage of alcohol vapor and the number of flies that exhibit the Loss of Righting reflex (LoRR) or sedation are counted every 5 min. The data can be analyzed using three different statistical approaches. The first is to determine the time at which 50% of the flies have lost their righting reflex and use an Analysis of the Variance (ANOVA) to determine whether significant differences exist between time points. The second is to determine the percentage flies that show LoRR after a specified number of minutes, followed by an ANOVA analysis. The last method is to analyze the whole times series using multivariate statistics. The protocol can also be used for non-circadian experiments or comparisons between genotypes.

Drosophila has emerged as a significant model system for dissecting the cellular and molecular underpinnings of behavioral responses to alcohol. Here we present a protocol for the collection of alcohol sensitivity data in a circadian context that can be easily applied to other experiments and is well-suited for undergraduate research.

وFlyBar: إدارة الكحول الذباب

Fruit flies (Drosophila melanogaster) are an established model for both alcohol research and circadian biology. Recently, we showed that the circadian ...

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human populations, the Drosophila model allows strict control over genetic background, and virtually unlimited numbers of individuals of the same genotype can be reared rapidly under well-controlled environmental conditions without regulatory restrictions and at relatively low cost. Flies exposed to ethanol undergo physiological and behavioral changes that resemble human alcohol intoxication, including loss of postural control, sedation, and development of tolerance. Here, we describe a simple, low-cost, high-throughput assay for assessing alcohol sedation sensitivity in large numbers of single flies. The assay is based on video recording of single flies introduced without anesthesia in 24-well cell culture plates in a set-up that enables synchronous initiation of alcohol exposure. The system enables a single person to collect individual ethanol sedation data on as many as 2,000 flies within an 8 h work period. The assay can, in principle, be extended to assess the effects of exposure to any volatile substance and applied to measure effects of acute toxicity of volatiles on other insects, including other fly species.

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

Current methods to measure alcohol sensitivity in Drosophila are designed to test groups of flies. We present a simple, low-cost, high-throughput assay for assessing alcohol sedation sensitivity in large numbers of single flies. The method does not require specialized tools and can be performed in any laboratory using common materials.

طريقة عالية الإنتاجية لقياس وقت تقس الكحول من الكلينوفيلا الفردية

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human ...

Behavior

Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization

Alcohol use disorder (AUD) remains a serious problem in our society. To develop effective interventions for addiction, it is important to understand the underlying neurobiological mechanisms, for which diverse experimental approaches and model systems are needed. The main ingredient of alcoholic beverages is ethanol, which causes adaptive changes in the central nervous system and behavior upon chronic intake. Behavioral sensitization (i.e., escalated responses) in particular represents a key adaptive change underlying addiction. Most ethanol-induced behavioral sensitization studies in animal models have been conducted on the locomotor activating effect of ethanol. A prominent effect of ethanol is behavioral disinhibition. Behavioral sensitization to the disinhibition effect of ethanol, however, is underrepresented. To address this issue, we developed the Flypub assay that allows measuring the escalated increase in disinhibited courtship activities upon recurring ethanol exposure in Drosophila melanogaster.&#160;Here, we report the step-by-step Flypub assay including assembly of ethanol exposure chambers, setup of the assay station, criteria for fly care and collection, ethanol delivery, quantification of disinhibited courtship activities, data processing and statistical analysis. Also provided are how to troubleshoot critical steps, overcome limitations and expand its utility to assess additional ethanol-induced behaviors. The Flypub assay in combination with powerful genetic tools in Drosophila melanogaster will facilitate the task of discovering the mechanism underlying ethanol-induced behavioral sensitization.

The Flypub assay measures the behaviors that the fruit fly Drosophila melanogaster displays under the influence of ethanol. The assay can be readily mastered by experimenters at all levels and applied to various vaporized stimuli, facilitating substance abuse and addiction studies.

Flypub لدراسة الإيثانول الناجم عن تثبيط السلوكية والتوعية

Alcohol use disorder (AUD) remains a serious problem in our society. To develop effective interventions for addiction, it is important to understand the ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

الفحص مباشرة للالكمي لتجنب الاجتماعي في<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

طريقة بسيطة لقياس التغيرات في السلوك المكافأة التماس طريق<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

و، الفحص السلوكية قابلة غير مكلفة لقياس الإيثانول التخدير الحساسية والتسامح السريع في

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video